Препарат м 16 отзывы: Страница не найдена — Члена.ру

Препарат мужская сила препараты для повышения потенции отзывы

Ключевые теги: лучшее для поднятия потенции, таблетки для улучшения потенции хорошо или нет, лучшая зелень для потенции.

Настойка из вина для потенции, препарат для потенции сша, Купить EroTabs капсулы для потенции в Талгаре, солгар для потенции мужчин, че надо есть для потенции.

Принцип действия Ant King

ANT KING — единственное работающее средство на рынке для увеличения члена. Этот комплекс, который не вызывает никаких побочных эффектов, не вызывает аллергических реакций. Специальные ферменты, входящие в состав, благотворно влияют на ткани пениса, которые безвредно растягиваются, а с ними и камеры кавернозного тела полового члена, что и способствует реальному увеличению как и в длине так и в обхвате.

Препораты для потенции мужчинам лекарства для повышения потенции аликапс, какие таблетки лучше всего для потенции. Что нужно для укрепления потенции израильские лекарства для потенции, таблетки для увеличения члена недорог правда о средств для потенции. Чем хороша петрушка для потенции капсулы для быстрого повышения потенции, капсулы для быстрого повышения потенции.

Официальный сайт Ant King комплекс для потенции и увеличения члена

Состав Ant King

Что нужно для укрепления потенции препарат для потенции украина, Купить Формицитин капсулы для потенции в Макеевке. Средства для потенции у мужчин отзывы спрей для потенции в аптеках, мед и орехи для потенции пропорции. Препарат для потенции сша спрей м-16 для потенции купить в аптеке в ульяновске, че надо есть для потенции. Для усиления потенции бады для мужчин для потенции купить в аптеке в казани, крем для увеличения объема полового члена.

Результаты клинических испытаний Ant King

Потенция и эрекция для улучшения американский препарат для повышения потенции, йога для мужчин повышающая потенцию. Яичный желток для потенции крапива для повышении потенции, настойка зверобоя для потенции для усиления потенции. Мази для усиления потенции бады для мужчин для потенции купить в аптеке в казани, что есть для повышения эрекции потенции.

Мнение специалиста

Густав Зальцер, представитель Ant King, принимал участие в разработке: Это очень деликатная тема, о которой не принято говорить, — эрекция. Многие мужчины переживают по этому поводу и это правильно. Они испытывают неуверенность, опасаются вступать в отношения с женщинами, их жизнь сложно назвать полноценной и счастливойЕще несколько лет тому назад проблему можно было решить несколькими способами — оперативное вмешательство, сеансы психотерапии или упражнения для укрепления мышц промежности. Это долго, больно и стоит недешево. А результат никто не гарантирует. Сегодня все изменилось.

Для потенции электрон йога для мужчин повышающая потенцию, имбирь для потенции отзывы врачей. Капсулы для потенции распутин купить в аптеке недорогое для потенции, отвар для повышения потенции у мужчин что лучшее помогает для увеличения члена. Что нужно для укрепления потенции недорогое для потенции, какие таблетки лучше для увеличение члена.

Способ применения Ant King

1 этап 5 эфирных масел готовят кожу к растяжению 2 этап Активные пектины наращивают ткани органа и в длину, и в диаметре 3 этап Железо, натрий, цинк, кальций, обеспечивают продолжительный эффект

Саймы препарат для потенции молот тора для потенции киев, препарат для потенции украина. Алфавит для потенции какие овощи нужно есть для повышения потенции, настойка из вина для потенции алфавит для потенции. Настойка зверобоя для потенции чем хороша петрушка для потенции, яичный желток для потенции.

Как заказать Ant King?

Заполните форму для консультации и заказа Ant King комплекс для потенции и увеличения члена. Оператор уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 1-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении

Средства для разового повышения потенции динамика таблетки для потенции инструкция по применению, препарат для потенции украина. Недорогие лекарства для улучшения потенции потенция и эрекция для улучшения, Купить Эровин средство для потенции в Азове клизмы для потенции. Форум крем для увеличения члена эфирное масло для повышения потенции у мужчин, лучшее для поднятия потенции. Средства для потенции у мужчин отзывы молот тора капли для потенции производитель, Купить EroTabs капсулы для потенции в Талгаре.

Что из еды хорошо для потенции, молодец капсулы для потенции, мед и орехи для потенции пропорции, имбирь для потенции отзывы врачей, чем хороша петрушка для потенции, что надо делать для улучшения потенции, меню для мужчины для потенции.

Официальный сайт Ant King комплекс для потенции и увеличения члена

Купить Ant King комплекс для потенции и увеличения члена можно в таких странах как:

Россия, Беларусь, Казахстан, Киргизия, Молдова, Узбекистан, Украина, Эстония, Латвия, Литва, Болгария, Венгрия, Германия, Греция, Испания, Италия, Кипр, Португалия, Румыния, Франция, Хорватия, Чехия, Швейцария, Азербайджан , Армения ,Турция, Австрия, Сербия, Словакия, Словения, Польша

С юности комплексовал по поводу маленького члена. Девственности лишился только в 18, и то, пришлось вынести унизительный взгляд. Сейчас прохожу курс терапии. Всего за 2 недели он увеличился на несколько см! Для меня это шок и радость.

Член растет на глазах! Использовать ANT KING очень просто и абсолютно безопасно. Я многое перепробовал, помпы, крема, таблетки. Эффекта не было вообще. Продолжаю использовать капсулы. Устраивает на 100%!

Извиняюсь, не заметил на сайте сначала информацию про наложенный платеж. Тогда все в порядке точно, если оплата при получении. Пойду, оформлю себе тоже заказ.

Реальные отзывы о средстве для потенции М16

Спрей М16 – это абсолютно натуральный препарат. Биологически активные добавки пользуются в последнее время особым спросом именно благодаря отсутствию побочных эффектов. Средство можно применять в любом возрасте.

До покупки и начала применения ознакомьтесь с рекомендациями врачей и отзывами покупателей. Рано или поздно мужчина сталкивается с такой проблемой как эректильная дисфункция и на помощь придет спрей М16.

Видео отзывы на спрей М16:

Что представляет из себя этот спрей

Данный вид лекарства помогает усилить мужскую силу, особенно в волнительные моменты. Он способствует усилению приятных впечатлений во время секса и самого оргазма.

Благодаря натуральным ингредиентам, спрей можно применять регулярно или при необходимости. Побочный эффект выявляется крайне редко и вызван индивидуальной непереносимостью к компонентам препарата. Специально подобранный состав помогает более быстрому проникновению и действию на половой член, приблизительно через 5-7 минут.

Некоторые пары используют спрей вместо смазки. Применение его вызывает спорное мнение у пользователей, но необходимо разобраться, что это такое.

Состав

О препарате много разнообразные отзывы. Для того чтобы понять действие самого препарата, необходимо взглянуть на его состав. В нем абсолютно нет никакой химии. Это говорит о том, что не нужно так сильно беспокоиться о состоянии своего здоровья – препарат не имеет побочного действия.

• Глицин. Он положительно воздействует на потенцию. Дополнительно его применяют для устранения эмоционального напряжения.
• Экстракт гуарану. Он способен увеличить работоспособность человека, в том числе и усилить сексуальное влечение. Помогает устранить накопленный стресс.
• L-аргинин. Спрей наносят на половый член. ВО время секса он помогает улучшить кровоток и к половому члену, и к влагалищу. Увеличивается количество природной смазки, которая необходима для секса.
• Магний. Это необходимый микроэлемент. Он нужен для увеличения сексуального влечения. Он помогает победить стресс, улучшает настроение. Способен устранить усталость и раздражение.

Как использовать?

Многие люди задаются вопросом, когда можно и нужно использовать спрей. Применять средство для потенции необходимо для решения следующих проблем:

• Если у мужчины быстро возникает возбуждение и настолько же быстро оно исчезает.
• Применять препарат нужно мужчинам старше 60 лет.
• При большом количестве комплексов.
• При негативном опыте в прошлом.
• При слабых оргазмах.
• Если на протяжении длительного времени не получается испытать оргазм.

Применение спрея абсолютно простое, почему и заслуживает положительные отзывы со стороны покупателей. Тем более что данный продукт не может навредить внутренним органам. Спрей нужно нанести на головку и спустя несколько минут уже будет наблюдаться замечательный результат.

Отзывы врачей

Отзывы врачей о спрее М16 для потенции в Интернете абсолютно разные. Благодаря положительным отзывам от врачей и покупателей возникает желание испробовать данный препарат на себе.

Владимир Кириченко, уролог. «Спрей М16 я рекомендую применять для тех людей, которые страдают от различных нарушений в работе печени. Применение таблеток для таких людей категорически запрещено. Употребление «Виагры» негативно отражается на работе всего организма. Поэтому если проблемы в сексе связаны только с психологическим фактором, то применение спрея помогает быстро и легко справиться с данной проблемой».

Кирилл Егорович, сексолог. « Я рекомендую принимать спрей М16 при наличии следующих проблем:

• Потеря сексуального интереса. Возможно, со временем появится необходимость в более серьезном лечении. Но сначала нужно испробовать более простые методы лечебной терапии.
• Назначаю применение средства для потенции для семейных пар, которые живут вместе на протяжении длительного времени. Проблема в таких парах заключается в том, что жены прекращают за собой ухаживать. Это и влечет проблемы в супружеской постели. Хорошим средством в данном случае может послужить использование данного препарата.
• Для молодых людей, у которых есть большое количество комплексов. Это проблема психологическая. Спрей абсолютно безопасный, поэтому его применение для молодых людей скажется только положительно.

Эффект

В последнее время на рынке появилась новинка: презервативы, которые продлевают секс. Оказывается, это происходит благодаря потере чувствительности полового члена. Конечно, сначала после применения спрея появляется дискомфорт.

Преимущества	Возможности
Продолжительность	Увеличивается продолжительность полового акта. Результат не на всю ночь, но в этом нет необходимости
Удобство	Его удобно переносить с собой
Эффект	В несколько раз усиливает ощущения
Возможные побочные действия	Легкий дискомфорт после нанесения
Состав	Полностью натуральный состав

Отзывы о спрее на форуме

Спрей М16 заслужил очень много положительных отзывов. Например, есть примеры, когда мужчины пишут, что этот препарат помогает справиться с нарушениями в потенции. Конечно, если проблема скрыта в нарушении кровообращения органа, заболеваниях, то один спрей не поможет. Тем более он не может решить проблему раз и навсегда.

Многие обращают внимание на тот факт, что данный препарат абсолютно натуральный. Единственным существенным «минусом» является то, что приобрести его достаточно проблематично. Сделать это можно в Интернете и только на официальном сайте.

Действие препарата направлено сразу на три направления: улучшение кровообращения, мышечной ткани и чувствительности.

На форуме можно встретить отзывы людей разного возраста. Все они утверждают, что препарат помогает усилить ощущения во время оргазма, делает секс более ярким и насыщенным. Усиливает эрекцию и помогает продлить ее намного дольше.

Несколько мужчин оставили свой отзыв и поделились ощущениями при половом акте. Например, при затухании сексуального желания во время полового акта применение спрея помогло восстановить эрекцию. Все, кто использовали препарат, замечают его положительное действие.

Противопоказания при применении заключаются в том, что спрей для потенции не рекомендовано использовать при повреждении кожи на половом члене. Также возможно возникновение зуда или аллергической реакции при индивидуальной непереносимости компонентов препарата. При соблюдении дозировки препарата побочного действия от препарата выявлено не было.

Реальные отзывы покупателей в Интернете

Егор. Мне очень понравилась информация в Интернете по данному препарату. То, что я давно искал. Также положительно повлияла на мое решение цена. Заказал этот препарат, теперь не могу дождаться, пока он придет.

Вячеслав. В мои годы мечтать о хорошей потенции уже поздно. Но оказалось не все потеряно. Благодаря такому подарку мы смогли с женой вспомнить былые годы. Она осталась довольна.

Ярослав. Этот препарат помог усилить мою эрекцию и продлить половой акт. Моя девушка в восторге.

Негативные отзывы в Интернете в основном появляются из-за неправильного использования препарата. Также многие молодые люди столкнулись с приобретением подделки по более низкой цене. Но не стоит забывать, что «скупой платит дважды». Заказывать нужно только на официальном сайте.

Аптечная сеть | Медицинское объединение «Новая больница»

Аптечная сеть «Новой больницы» насчитывает обширную сеть в Екатеринбурге и Свердловской области.

В аптеках «Новой больницы»:

• все необходимые лекарственные средства,
• предметы ухода за больными,
• медицинское оборудование,
• лечебная косметика;
• большой выбор недорогих оправ, широкий ассортимент линз;
• индивидуальные консультации специалистов,
• полная справочная информация о медикаментах.
• скидки по дисконтным картам
• Действуют скидки пенсионерам

В аптеках «Новой больницы» вы можете:

• получить информацию о наличии лекарств и цен на них в аптеках сети «Новая больница»;
• подобрать очки, получить консультацию оптиметриста, которая при заказе очков будет бесплатной
• отремонтировать старые очки или заказать новые

Адреса аптек «Новой больницы»

Фармацевтический отдел

Фармацевтический отдел Медицинского Объединения «Новая больница» был создан в 1993 г. и сейчас является одним из ведущих дистрибьюторов России.

Наши поставщики — это более 50 отечественных фармацевтических заводов и поставщиков, и свыше 40 крупнейших зарубежных фирм-производителей лекарственных средств. Отечественные препараты при этом составляют порядка 45 % в структуре ассортимента. Остальное — импорт. Общая численность сотрудников — 116 человек. Практически все сотрудники отдела — специалисты с фармацевтическим образованием.

Основная цель — создание качественной системы обслуживания клиентов посредством:

• увеличения ассортимента;
• гибкой системы оплаты товара, включающей скидки;
• обеспечения полного сервиса — от резервирования товара на складе до его оперативной доставки;
• быстрое и качественное обслуживание покупателей, которое гарантируется полностью компьютеризированной системой продаж.

Фармацевтический отдел находится по адресу: Екатеринбург, ул. Гурзуфская, 55
Телефон: +7 (343) 212-90-00
Факс: +7 (343) 212-94-22
Сайт: http://fonb.ru/

Чем страшна болезнь Паркинсона и каково с ней жить

«Мой супруг — офицер, человек очень уравновешенный. Он всю жизнь работал, ни на что не жаловался, я никогда не слышала от него про усталость. Но приблизительно шесть лет назад он стал слишком тихим, мало разговаривал — просто сидел и смотрел в одну точку. Мне даже в голову не пришло, что он болен. Наоборот, ругала, что раньше времени постарел. Примерно тогда же к нам приехала двоюродная сестра из Англии — она работает в больнице — и сразу сказала, что у Рафика все очень плохо, нужно завтра же вести его к врачу. Так мы узнали о болезни Паркинсона», — вспоминает Седа из Еревана.

Признаки болезни

Паркинсон — одна из самых страшных фамилий, что можно услышать в кабинете у невролога. Она принадлежит английскому врачу, который в 1817 году описал шесть случаев загадочной болезни. День рождения Джеймса Паркинсона, 11 апреля, и выбран памятной датой Всемирной организацией здравоохранения.

Сам Паркинсон говорил о дрожательным параличе, ведь первое, что замечаешь у больных, — трясущиеся конечности. Но если присмотреться, еще видно, что они с трудом удерживают равновесие и шагают неуверенно, их движения медленные и скованные, а мышцы сильно напряжены. Все вместе это называется паркинсонизмом. Только паркинсонизм не всегда обусловлен болезнью, а болезнь проявляется не только так.

Тремору часто предшествуют беспокойный сон, потеря обоняния, тревога, подавленное настроение, запоры. Кто-то годами не придает этому значения, и связать симптомы с болезнью Паркинсона получается только на приеме у невролога. Но не все обращаются к нему из-за трясущихся конечностей. «Я стала замечать, что левая рука не болит, не беспокоит, а как будто не нужна. Я все делаю правой, а левая ничего делать не хочет», — вспоминает москвичка Татьяна Кулапина, которой диагностировали болезнь Паркинсона 20 лет назад. А у кого-то тремор появляется лишь тогда, когда уже заметно выражены другие симптомы.

На эту тему

Диагноз обескураживает даже тех, кто о нем догадывался. «Я не могла ни спать, ни есть. Даже от воды тошнило», — говорит Татьяна Кулапина. Сначала она хотела покончить с собой, решив, что такая никому не нужна, и еще восемь лет скрывала болезнь от мужа. Татьяна Кулапина вспоминает это спокойно и дальше рассказывает про вынужденную, но на удивление интересную работу с детьми, новых подруг и шведскую стенку, которую по ее просьбе установил муж. «Несмотря на болезнь, я не чувствую своего возраста. Каждое утро я просыпаюсь и говорю себе: «Я счастлива, я живу»! Главное — верить», — считает она.

Но болезнь неизлечима, изнурительна, а для кого-то еще и разорительна, поэтому свыкнуться тяжело. «Сказали научиться жить с этой болезнью, не сдаваться. Вот я и стараюсь. Стараюсь не плакать, не расстраивать родных», — говорит дрожащим голосом Татьяна Орлова из Белгорода. Ей поставили диагноз в 2014-м. Вместе с другими симптомами болезни Паркинсона перечисляют апатию и хандру, подразумевая общую причину — поражение мозга, но их вызывает и опыт болезни.

На более поздних стадиях апатия накатывает все чаще. Тремор усиливается, человек то и дело застывает и не может пошевелиться, а когда стоит или идет, часто падает. Говорить, глотать, спать становится труднее. Мучают панические атаки, галлюцинации или и то и другое. Ум притупляется. У большинства из тех, кто болеет дольше 20 лет, развивается деменция.

Не у каждого человека появляются все симптомы, с одинаковой остротой и в одном и том же порядке; у кого-то болезнь прогрессирует медленно, а другим трудно справиться с домашними делами уже через несколько лет после того, как они впервые заподозрили неладное. Кое-какие закономерности просматриваются. Например, когда над тремором преобладают другие моторные симптомы, болезнь обычно развивается быстрее. Но почему так происходит, непонятно, как непонятно, что вообще вызывает болезнь Паркинсона.

Причины болезни

В 1919 году эмигрировавший во Францию невропатолог Константин Третьяков обнаружил, что у больных гибнут клетки в области мозга под названием «черная субстанция». Эта область частично отвечает за движения, мотивацию, обучение, и в ней вырабатывается большая часть дофамина, который в поп-психологии считается гормоном радости. Что убивает нейроны, Третьяков не понял, но обратил внимание на сгустки белка в сохранившихся клетках — недавно открытые тельца Леви (забавно, что Фридрих Леви прохладно отзывался о работе Третьякова, хотя без нее название могло и не прижиться).

Эти два признака — потеря нейронов в черной субстанции и тельца Леви либо другие белковые образования в клетках — встречаются по отдельности и только вместе однозначно указывают на болезнь Паркинсона. Но и спустя 100 лет после исследования Третьякова неизвестно, гибнут ли клетки из-за скоплений вредного белка или у обоих процессов общая причина.

На эту тему

Механизм болезни Паркинсона приоткрылся благодаря случаям у близких родственников. Если после отца заболел сын, то можно предположить, что дело хотя бы отчасти в наследственности. Генетики стали сравнивать и выявили несколько мутаций, которые у больных встречаются чаще, чем у остальных. Мутация — это что-то вроде инструкции, переписанной с ошибками. Если бы существовал ген гаек, то из-за одной мутации они получались бы слишком большими, а из-за другой — с левой резьбой. Такие гайки не прикрутить к болтам, поэтому в узле, где они требуются, вероятна поломка.

Организм или отдельные клетки тоже можно представить как машину. Гены с выявленными мутациями указали на устройство узлов этой машины. Например, так был определен белок в сгустках из нервных клеток. А сами мутации позволили предположить, как поломки приводят к аварии — болезни Паркинсона. Ученые выдвинули несколько гипотез. Но исчерпывающей среди них нет, а из-за пустот на схеме молекулярных процессов в клетках иногда даже трудно сказать, согласуются эти гипотезы или противоречат друг другу.

Дополнить эту схему можно с помощью других известных факторов риска. Обычно болезнь Паркинсона начинается после 60 лет. Реже ее диагностируют женщинам, курильщикам, любителям напитков с кофеином и тем, кто принимает нестероидные противовоспалительные препараты, а чаще — тем, кто долго соприкасался с промышленными ядами для уничтожения вредителей и некоторыми другими химикатами, перенес черепно-мозговую травму, сельским жителям и тем, кто пьет колодезную воду (вероятно, из-за химикатов с полей и ферм).

Все это как-то направляет молекулярные процессы в клетках мозга, но пока даже не всегда понятно, прямое это влияние или опосредованное, например через иммунную систему. Как минимум часть факторов взаимосвязана. Например, контакт с гербицидом паракватом и травма головы в анамнезе вместе опаснее, чем по отдельности, а кофеин, судя по всему, приносит больше пользы с мутациями, которые меняют метаболизм этого вещества. Возможно, дальнейшие исследования позволят построить более точную модель болезни Паркинсона. Интерес к ней точно не пропадет: продолжительность жизни увеличивается — все больше людей оказываются в группе риска.

Жизнь с болезнью

В России болезнь Паркинсона есть примерно у 210–220 тыс. человек. Но единого реестра не существует — оценка рассчитана по косвенным показателям. Анастасия Обухова, кандидат медицинских наук с кафедры нервных болезней Сеченовского университета и специалист по болезни Паркинсона, считает ее заниженной. «Многие приходят уже на развернутых стадиях болезни. При расспросе удается выяснить, что признаки появились еще несколько лет назад. У большинства наших людей действует принцип «пока гром не грянет, мужик не перекрестится». Они читают в интернете, спрашивают соседок, а к врачу не обращаются. Это в Москве, а в маленьких городках и поселках к врачу идут, только если совсем помирают», — объясняет она.

На эту тему

Обратившись за помощью, кто-то получает правильный диагноз и схему лечения быстро, а кому-то приходится ждать. Татьяна Кулапина вспоминает, что в 2002 году болезнь Паркинсона ей диагностировали с третьего раза. Но это только половина дела. Трудность заключается в том, что у препаратов сильные побочные эффекты, которые приходится устранять другими лекарствами, а эффективная доза со временем меняется. Татьяне Кулапиной лекарства подобрали сразу, и с тех пор она об этом не беспокоилась.

Татьяне Орловой лекарства безуспешно подбирали три года. По ее словам, в Белгороде много неврологов, но никто не специализируется на болезни Паркинсона. Подходящую схему ей составили в московском Научном центре неврологии. Она возвращается туда каждый год, чтобы заново подобрать лекарства: болезнь прогрессирует. Лучше делать это дважды в год, но полис ОМС покрывает только один раз. «Если препарат не подействует, я позвоню — они скажут, какая замена», — говорит Татьяна Орлова.

Расходы на лечение зависят от региона. По идее, лекарства полагаются бесплатно, но не везде есть все, что нужно, а иногда доступны только дженерики. По словам Татьяны Орловой, в Белгороде бесплатно можно получить малую часть препаратов, остальное приходится покупать. «Лекарства очень дорогие. Вся пенсия уходит: где-то тысяч 15», — говорит она. А Татьяна Кулапина получает бесплатно все необходимое. Правда, иногда для этого нужно пристально посмотреть в глаза врачу. «Кто-то не знает [о бесплатных лекарствах], а в поликлинике могут промолчать, сэкономить. Иногда у меня накапливаются запасы, и я отправляю их почтой, потому что понимаю, как тяжело людям», — рассказывает она.

Иногда при болезни Паркинсона требуется операция на мозге. В Научный центр неврологии, где ей подобрали лекарства, Татьяна Орлова поехала из-за этого. «В 2017 году я увидела в телепередаче Владимира Тюрникова. Это нейрохирург. Я приехала на консультацию и согласилась на операцию. Тремор ушел сразу на операционном столе! Теперь если и появляется, то контролируемый. Как у обычных людей, когда понервничаешь. Но скованность осталась», — рассказывает она. Такие операции делают бесплатно, но по квотам. Татьяна Орлова получила ее по месту жительства на основании заключения из Москвы. Все заняло три месяца.

Поддерживать себя в форме больным помогает физиотерапия и упражнения. Хотя одни справляются сами, часто не обойтись без специалиста и оборудования, да и в компании проще развеяться. Но с этим тоже как повезет. «У нас есть школа танцев для пациентов с болезнью Паркинсона, есть специальные школы, где с ними проводят встречи, психотерапию, плавают в бассейне. Но все основано на энтузиазме докторов, которые этим занимаются», — говорит Анастасия Обухова.

Лекарства, операции, тренировки, консультации не останавливают гибель клеток мозга, зато позволяют дольше вести привычный образ жизни. Чем раньше началась терапия, тем лучше. Болезнь Паркинсона трудно распознать на ранних стадиях, ведь первым симптомам можно найти другие объяснения. Но если у вас или ваших близких они появились, на всякий случай стоит поговорить с врачом.

Марат Кузаев

Дирекция по координации деятельности медицинских организаций

Северо-Западный научный центр гигиены и общественного здоровья

Северо-Западный научный центр гигиены и общественного здоровья

Главная

• О центре

  Приветствуем Вас на официальном сайте Федерального бюджетного учреждения науки «Северо-Западный научный центр гигиены и общественного здоровья»!

  Наш Центр является старейшим в Европе учреждением, специализирующимся в области гигиены, медицины труда и общественного здоровья.

  Сегодня СЗНЦ гигиены и общественного здоровья это динaмично развивающаяся организация. Опираясь на многолетний oпыт, СЗНЦ продолжает научные традиции и развивает новые перспективные направления своей деятельности. География проектов СЗНЦ распространяется как на Санкт-Петербург и Северо-Западный регион России, так и на всю страну и Международную арену. Подробнее ознакомиться с историей, жизнью и работой Центра, его подразделениями и персоналиями Вы сможете в соответствующих разделах сайта.

• Научная деятельность

  Приоритетные научные направления, разрабатываемые нашим Центром:

  ● Разработка гигиенической концепции эффективной профилактики неинфекционных заболеваний среди населения
  ● Развитие теории комбинированного действия природно-климатических и антропогенных факторов на здоровье населения в Арктике.
  ● Разработка системы социально-гигиенического мониторинга репродуктивных нарушений и мер их профилактики среди населения
  ● Разработка современной системы управления профессиональными и экологическими рисками в горнодобывающей, металлургической, машиностроительной промышленности, судостроении.

  Подробнее

• Медицинские услуги

  Спектр медицинских услуг оказываемых нашим Центром включает:

  ● проведение обязательных предварительных и периодических медицинских осмотров
  ● оформление и продление личных медицинских книжек
  ● оформление медицинских справок для иностранных граждан
  ● оформление медицинских справок для поступления на госслужбу
  ● оформление медицинских справок для работы с гостайной

  ● рентгеновская и ультразвуковая диагностика

• Санитарно-эпидемиологическая экспертиза

  Наш центр осуществляет проведение санитарно-эпидемиологической экспертизы на соответствие санитарно-эпидемиологических нормам и правилам с выдачей экспертного заключения:

  ● на проектную документацию
  ● на продукцию

   

  Подробнее

• Клинические испытания

  На базе клинических и научных отделе­ний нашего Центра проводятся следующие виды исследований:

  ● доклинические исследования на животных и альтернативные токсикологические методы исследований
  ● клинические исследования лекарственных препаратов (I, II, III, IV фазы), в том числе и клинические исследования по биоэквивалентности
  ● исследования изделий парфюмерно-косметической продукции
  ● исследования медицинских изделий

   

  Подробнее

• Испытательный лабораторный центр

  На базе нашего Центра функционирует испытательный лабораторный центр, имеющий аккредитацию  в национальной системе аккредитации, в котором проводятся лабораторные исследования необходимые в целях:

  ● производственного контроля
  ● специальной оценки условий труда
  ● сертификации, государственной регистрации
  ● получения  разрешения на строительство
  ● при вводе объектов в эксплуатацию
  ● расчёта, подтверждения, сокращения  границ  санитарно-защитной зоны
  ● мониторинга загрязнения  почв, воздуха, водных объектов

  Подробнее

Новости

23 Апр 2021 г.

Об участии в V Санкт-Петербургском Международном Форуме Труда Подробнее

20 Апр 2021 г.

27 апреля в 14 часов состоится заседание Ученого совета ФБУН «СЗНЦ гигиены и общественного здоровья» Подробнее

16 Апр 2021 г.

Об участии в VI Международной научной конференции «Арктика: история и современность» Подробнее

02 Апр 2021 г.

Об участии в круглом столе «Чистая Ладога: проблемы и пути решения» Подробнее

02 Апр 2021 г.

Р Е Ш Е Н И Я заседания Ученого совета ФБУН «Северо-Западный научный центр гигиены и общественного здоровья» от 30 марта 2021 г. Подробнее

Официальные ресурсы

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Министерство здравоохранения Российской Федерации

Национальное научное медицинское общество гигиенистов и санитарных врачей

Администрация Санкт-Петербурга

Комитет по борьбе с коррупцией

Пожалуйста, выберите тему обращения:

×

Запись в стационар

[contact-form-7 title=»Запись в стационар»] ×

Отзыв о работе

[contact-form-7 title=»Отзыв о работе»] ×

Онлайн заявка для добровольцев

[contact-form-7 title=»Онлайн заявка для добровольцев»] ×

Сообщение о факте коррупции

[contact-form-7 title=»Сообщение о факте коррупции»] ×

Медицинские осмотры

[contact-form-7 title=»Медицинские осмотры»] ×

Медицинские справки

[contact-form-7 title=»Медицинские справки»] ×

Личная медицинская книжка

[contact-form-7 title=»Личная медицинская книжка»] ×

Клинические испытания

[contact-form-7 title=»Клинические испытания»] ×

Санитарно-эпидемиологическая экспертиза

[contact-form-7 title=»Санитарно-эпидемиологическая экспертиза»] ×

Испытательный лабораторный центр

[contact-form-7 title=»Испытательный лабораторный центр»] ×

Общее

[contact-form-7 title=»Общее»] ×

ГБУЗ НО «Городская поликлиника №31 Советского района»

Для Вашего удобства и сокращения времени пребывания в пункте вакцинации Вы можете заранее скачать и заполнить бланк анкеты и согласия:

Анкета пациента

Добровольное информированное согласие

Уважаемые пациенты!

Для вызова врача на дом и других обращений организованы WhatsApp и Viber приемные по номеру: +7 (991) 831-28-40

УВАЖАЕМЫЕ ПАЦИЕНТЫ!

В ГБУЗ НО «Городская клиническая больница №31 Советского района г. Нижнего Новгорода» возобновлено проведение профилактических осмотров и диспансеризации определенных групп взрослого населения СТРОГО по времени и по предварительной записи! Записаться Вы сможете на портале пациента, через личный кабинет госуслуг или на официальном сайте нашей больницы в разделе «Электронная запись на прием к врачу».

Возможно проведение диспансеризации определенных групп взрослого населения в течение одного дня

Данная услуга предоставляется в кабинете медицинской профилактики, расположенном в отдельном здании для исключения пересечения потоков пациентов (больных и здоровых), а именно в филиале поликлиники по адресу

г. Нижний Новгород, ул. Ванеева, д.23/10, вход со двора.

Приказ Министерства здравоохранения Нижегородской области от 31 июля 2020 года №315-685/20П/од «О проведении информационно-разъяснительной работы с гражданами, имеющими право на набор социальных услуг в рамках Федерального закона № 178-ФЗ «О государственной социальной помощи»»

ПАМЯТКА для граждан, имеющих право на получение набора социальных услуг (презентация)

Телефон горячей линии о разъяснении набора социальных услуг (сохранение права на получение льготных лекарственных препаратов и медицинских изделий) — 233-39-31 добавочный 328.

Профилактика коронавирусной инфекции

Телефон горячей линии по коронавирусу: 428-99-41

Внимание пациентам!

Открыта электронная запись на прием к врачу через региональный Портал пациента (https://portal52.is-mis.ru).

Расписание доступно в объеме 14 дней.

Актуализация расписания осуществляется ежедневно в 0 часов 00 минут.

Информация размещена также на сайте ГБУЗ НО «Городская поликлиника № 31»

Администрация поликлиники

Уважаемые пациенты!

С 06.05.2019 г. вступил в силу новый приказ Минздрава России от 13.03.2019 г. №124н «Об утверждении порядка проведения профилактического медицинского осмотра и диспансеризации определенных групп взрослого населения», ознакомиться с которым можно по ссылке

Уважаемые пациенты. В исполнение Федерального закона от 29 декабря 2006 г. №255-ФЗ «Об обязательном социальном страховании на случай временной нетрудоспособности и в связи с материнством» и в соответствии с Постановлением Правительства РФ от 16 декабря 2017 г. №1567 «Об утверждении Правил информационного взаимодействия страховщика, страхователей, медицинских организаций и федеральных государственных учреждений медико-социальной экспертизы по обмену сведениями в целях формирования листка нетрудоспособности в форме электронного документа» Вы можете оформить листок нетрудоспособности в форме электронного документа

телефон горячей линии по кори 428-99-41

Памятка для граждан об оказании медицинской помощи

Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Нижегородской области «Нижегородский областной центр медицинской профилактики» информирует об изменении режима работы «горячей линии», способствующей прекращению потребления табака и лечению табачной зависимости, среди населения Нижегородской области с 10.07.2018. Контактный телефон 8 831 436 45 37. Режим работы горячей линии 9.00 – 15.00 (пн – пт)

Памятка Генеральной прокуратуры Российской Федерации «Мы против в коррупции в здравоохранении»

 В целях исполнения Федерального закона от 05.12.2017 №392-ФЗ «О внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации по вопросам совершенствования проведения независимой оценки качества условий оказания услуг организациями в сфере культуры, охраны здоровья, образования, социального обслуживания и федеральными учреждениями медико-социальной экспертизы», информируем Вас о проведении независимой оценки качества условий оказания услуг медицинскими организациями (далее НОК), в т.ч. электронным голосованием на портале независимой оценки качества https://www.nok.rosminzdrav.ru

ВНИМАНИЕ!
На базе государственного казенного учреждения здравоохранения Нижегородской области «Нижегородский территориальный центр медицины катастроф» работает «Горячая линия» по приему, регистрации учету поступивших обращений граждан по вопросам оказания медицинской помощи и лекарственного обеспечения на территории Нижегородской области – 8 (831) 250-94-03 — КРУГЛОСУТОЧНО

  Нам важно знать Ваше мнение! 

Актуальную информацию о предоставлении Государственных Услуг можно получить в социальных сетях и на интернет-портале Государственных и муниципальных услуг Нижегородской области

vk.comfacebook.comgu.nnov.rugosuslugi.ru

 На Всероссийском портале выгодных предложений размещена информация об   Общественном бизнес-лектории субъектов РФ.

Основная цель бизнес-лектория провести долговременную серию рабочих дискуссий для внимания населения субъектов РФ и услышать мнения руководителей региональных и муниципальных организаций по таким темам, как новый облик социальной сферы, технологическое обновление национальной экономики и улучшение делового климата, совершенствование системы государственного управления и развитие бизнес-проектов на местах. Более подробная информация на http://где-дешево.рф/lectorium

 Вниманию пациентов!

Поликлиника ГБУЗ НО «Городская поликлиника №31 Советского района» начинает работать по предварительной записи к врачам терапевтам-участковым и врачам-специалистам, ведущим амбулаторный прием.

Запись осуществляется следующими способами:
1. По телефону 233-39-31; дополнительные номера для вызова врача на дом 261-75-03 и +7-930-815-44-92
2. Непосредственно в регистратуре;
3. При помощи информационного киоска, расположенного в холле поликлиники;
4. Через портал пациента в Интернете по адресу:

Медицинская помощь пациентам, нуждающимся в неотложной помощи, оказывается без предварительной записи.
ВАЖНАЯ ИНФОРМАЦИЯ! На основании Федерального Закона №323 от 21 ноября 2011 года «Об основах охраны здоровья граждан РФ» гражданин имеет право выбрать медицинскую организацию и написать заявление на прикрепление к ней. Первичная медико-санитарная помощь в целях приближения ее к месту жительства, оказывается по территориально-участковому принципу (по месту жительства).

На основании совместного Приказа Министерства здравоохранения Нижегородской области и Территориального фонда обязательного медицинского страхования от 18 октября 2012 г. № 2433/387о, заявление необходимо заполнить до конца 2014 года.

Бланк заявления можно скачать на нашем сайте, заполнить его и предоставить в больницу.

Метилпреднизолон Пероральный: применение, побочные эффекты, взаимодействия, изображения, предупреждения и дозировка

Тошнота, рвота, изжога, головная боль, головокружение, проблемы со сном, изменения аппетита, повышенное потоотделение или угри. Если какой-либо из этих эффектов сохраняется или ухудшается, немедленно сообщите об этом своему врачу или фармацевту.

Помните, что ваш врач прописал это лекарство, потому что он или она посчитали, что польза для вас больше, чем риск побочных эффектов. Многие люди, принимающие это лекарство, не имеют серьезных побочных эффектов.

Это лекарство может повысить уровень сахара в крови, что может вызвать или усугубить диабет. Немедленно сообщите своему врачу, если у вас есть симптомы высокого уровня сахара в крови, такие как повышенная жажда / мочеиспускание. Если у вас уже есть диабет, регулярно проверяйте уровень сахара в крови в соответствии с указаниями и сообщайте о результатах своему врачу. Вашему врачу может потребоваться скорректировать лекарства от диабета, программу упражнений или диету.

Это лекарство может снизить вашу способность бороться с инфекциями. Это может повысить вероятность серьезной (редко смертельной) инфекции или усугубить любую инфекцию.Немедленно сообщите своему врачу, если у вас есть какие-либо признаки инфекции (например, лихорадка, озноб, постоянная боль в горле, кашель, белые пятна во рту).

Немедленно сообщите своему врачу, если у вас есть какие-либо серьезные побочные эффекты, в том числе: необычная прибавка в весе, изменения менструального цикла, боль в костях / суставах, легкие синяки / кровотечения, психические изменения / изменения настроения (например, перепады настроения, депрессия, возбуждение), мышечная слабость / боль, одутловатое лицо, медленное заживление ран, отек лодыжек / ступней / рук, истончение кожи, необычный рост волос / кожи, проблемы со зрением, быстрое / медленное / нерегулярное сердцебиение, симптомы желудочного / кишечного кровотечения (например, желудочного / боль в животе, черный / дегтеобразный стул, рвота, похожая на кофейную гущу).

Немедленно обратитесь за медицинской помощью, если у вас возникнут очень серьезные побочные эффекты, в том числе: судороги.

Очень серьезные аллергические реакции на этот препарат возникают редко. Однако немедленно обратитесь за медицинской помощью, если вы заметили какие-либо симптомы серьезной аллергической реакции, включая: сыпь, зуд / отек (особенно лица / языка / горла), сильное головокружение, затрудненное дыхание.

Это не полный список возможных побочных эффектов. Если вы заметили другие эффекты, не указанные выше, обратитесь к врачу или фармацевту.

В США —

Обратитесь к врачу за медицинской консультацией по поводу побочных эффектов. Вы можете сообщить о побочных эффектах в FDA по телефону 1-800-FDA-1088 или на сайте www.fda.gov/medwatch.

В Канаде — Обратитесь к врачу за медицинской консультацией по поводу побочных эффектов. Вы можете сообщить о побочных эффектах в Министерство здравоохранения Канады по телефону 1-866-234-2345.

Вакцины против COVID-19 | FDA

Жизнь и смерть мексиканского вора в законе

«Наркоборд» — это история Пабло Акоста, мелкого контрабандиста, который добился того, чтобы стать одним из самых крупных торговцев людьми в Мексике.Его рост параллелен подъему более крупных мексиканских картелей, и эта история представляет собой увлекательную историю роста нелегального бизнеса.

=== The Good Stuff ===

* Терренс Поппа пишет в легком для чтения стиле, и его рассказы в основном увлекательны. Он хороший рассказчик, и книга с самого начала привлекла мой интерес и удерживала его на всем протяжении. Хотя на самом деле он никогда не достигает рубежа «не могу отложить», я все же прочитал его через пару дней.

* Персонаж Акосты довольно интересен.Он весьма характерен и способен использовать насилие, хитрость и просто грубую силу для развития своего бизнеса. И хотя его подъем по лестнице «успеха» весьма примечателен, его более позднее падение столь же драматично и хорошо рассказано.

* Поппа улавливает разумное сочетание жесткой стороны Акосты (наркотики, насилие) и мягкой стороны (буквально пачкает руки, помогая финансировать и строить школы). В итоге он получает достаточно полную картину довольно простого, но сложного человека.

=== Не очень хорошие вещи ===

* Папа склонен к выдвижению обвинений без особых доказательств. Например, он обвиняет доминирующие партии в мексиканской политике в необузданной коррупции и контроле над выборами, но позволяет другим партийным кандидатам баллотироваться просто для того, чтобы пожирать ресурсы своей партии и сторонников. Интересные обвинения и, возможно, даже правдивые … но не подтвержденные в тексте или ссылках.

* Некоторые части книги содержат слишком много деталей и не развивают историю.Есть ряд второстепенных персонажей, которые входят и выходят из повествования в короткие сроки и не вносят вклад в общее повествование.

=== Резюме ===

Книга — отличный взгляд на увлекательную историю, и мне понравилось ее читать. Несмотря на то, что некоторые разделы были немного чрезмерно детализированы, по большей части книга продолжает развиваться и удерживает мой интерес на всем протяжении. Я бы порекомендовал его всем фанатам «истинного преступления», особенно тем, кто интересуется контрабандой наркотиков или находится в географической зоне Техасского района Биг-Бенд и приграничной части Мексики.

Бюст викингов, наркоман и заключенный, Лео Хайден перевернул его жизнь — Города-близнецы

Через десять лет после того, как викинги выбрали его в первом раунде драфта 1971 года, Лео Хайден сидел в тюремной камере в Кентукки. . Наркотики разрушили его карьеру в НФЛ и оставили его без гроша в кармане.

Хайден не мог позволить себе купить подарок на день рождения матери. Поэтому в 1983 году он написал ей письмо.

«Я написал ей:« Я знаю, что сильно разочаровал вас », — сказал он.«Я сказал ей:« Я, наверное, сделал много вещей, которые вызвали у вас смущение, но пока вы живы, я надеюсь, вам больше никогда не придется через это проходить, и я могу заверить вас, что в следующем году в на этот раз меня не посадят ».

Хайден выполнил свое обещание и был освобожден из тюрьмы в 1984 году после отбытия 22 месяцев пятилетнего срока за подделку чеков. Это произошло после того, как Хайден сделал все, что мог в 1970-х и начале 1980-х годов, чтобы заплатить за пристрастие к наркотикам, и после отбытия двух предыдущих тюремных сроков на общую сумму восемь месяцев.

Употребление наркотиков разрушило карьеру Хайдена в НФЛ вскоре после того, как в 1971 году команда «Викинги» выбрала ранбэк под номером 24. Впервые он начал употреблять кокаин и героин во время сезона новичков, в котором он сыграл всего семь игр. , и ни разу не запустил мяч.

В конце предсезонного сезона 1972 года бывшая звезда штата Огайо была сокращена «Викингами». Он провел два сезона без происшествий с «Сент-Луис Кардиналс», а затем его карьера закончилась в 1974 году после того, как он был арестован полицией на тренировочном поле чемпионата мира по футболу «Чикаго Файр» за неоплату счетов в отеле.Лео Хайден, раннинбэк, взятый миннесотскими викингами в первом раунде драфта НФЛ 1971 года, показывает свое национальное кольцо за титул чемпиона 1968 года, полученное в результате его футбольной карьеры в колледже в штате Огайо в Новом Орлеане 19 апреля 2021 года. Супер второкурсники »в команде Баккейса, которая победила USC 27-16 в розыгрыше 1 января 1969 года в Пасадене, штат Калифорния (Филип Стелли / офис шерифа округа Орлеан)

Прошло 50 лет с тех пор, как он был призван в армию. Перед 19 игроками, которые продолжили выступать на Pro Bowl, включая будущих игроков Зала славы Джека Хэма, Дэна Дирдорфа и Гарольда Кармайкла, и Хайдена спросили, считается ли его одним из крупнейших драфтовых бюстов в истории викингов.

«Как я себя чувствую?» — сказал Хайден. «Не очень хорошо. Но, эй, если это тот путь, который мне пришлось пройти, чтобы достичь того, кем я являюсь сегодня, то, возможно, это был путь, по которому меня Бог предназначил. Теперь у меня во всем есть цель ».

Это потому, что Хайден смог изменить свою жизнь. В 1986 году у него случился рецидив, когда он принял передозировку кокаина и провел три дня в больнице, но с тех пор он был трезв. Он провел более трех десятилетий, работая консультантом по вопросам наркотиков и помогая заключенным адаптироваться к обществу после того, как они вышли из тюрьмы.

С 2010 года 72-летняя Хайден работает в офисе шерифа прихода Орлеана в Новом Орлеане. Первые шесть лет он проработал директором программы возвращения на юго-запад Луизианы, а последние пять лет — координатором волонтерских услуг. И, после многих лет приставания своих троих детей, что ему необходимо уменьшить его рабочую нагрузку, Хайден наконец достиг соглашения в начале этого месяца о сокращении. 1 мая он выйдет на пенсию в качестве штатного сотрудника, но продолжит работать 20 часов в неделю.

«Лео был очень важен для нас, — сказал Марлин Гусман, шериф Орлеанского прихода, охватывающего всю городскую черту. «У него был опыт заключения в тюрьму, и он смог поставить себя (перед сокамерниками) в качестве примера. Он мог сказать им: «Послушайте, я был там». Они его очень уважают. Его зовут мистер Лео ».

Хайден больше не следит внимательно за НФЛ. Он не может вспомнить, когда в последний раз смотрел игру викингов по телевизору, и он не был в городах-побратимах с тех пор, как был освобожден викингами почти четыре десятилетия назад.Однако он сказал, что чиновник викингов недавно связался с ним по поводу возможного посещения игры, и он мог бы это сделать.
Лео Хайден (22 года) из штата Огайо растягивается и набирает девять ярдов, прежде чем его сбил Марти Хафф из Мичигана (на земле), когда игрок штата Мервин Тиг (90) появляется во время футбольного матча Большой десятки в Колумбусе, штат Огайо, 21 ноября 1970 года. (AP Photo)

Хайден продолжает следить за штатом Огайо, где он играл с 1968 по 1970 годы. Он побывал на нескольких встречах за сборную Баккейз за сборную 1968 года и часто с гордостью носит свое кольцо того сезона.

Хайден родился в Луисвилле, штат Кентукки, но вырос в основном в Дейтоне, штат Огайо, и имел 11 братьев и сестер. Сначала его воспитывала бабушка Берта Мэй Карри, а затем мать Джозефин Карри. Семья была бедной, Хайден иногда спал в одной постели с двумя братьями.

Но он превратился в лучшего футболиста в Огайо в средней школе Дейтона Рузвельта, и до того, как выбрал штат Огайо, его активно нанимали. На втором курсе в своем первом студенческом сезоне он пробежал 90 ярдов и поймал приземление в Rose Bowl.1 января 1969 года, когда «Баккейз», тренированные легендарным Вуди Хейсом, обыграли USC 27–16 и выиграли национальный чемпионат.

После этого сезона Хейден и другие Бакки завтракали в Колумбусе, штат Огайо, с президентом Ричардом Никсоном. Он начал получать письма от фанатов отовсюду.
Квотербек штата Огайо Рекс Керн (в центре), который в течение всего года передавал футбол этим двум бегунам, первым поздравил пару после того, как они попали в число четырех товарищей по команде Buckeye, которые отправились на драфте колледжа НФЛ в Колумбусе, штат Огайо, в январе.28 января 1971 года. Разрезанные бегущие спины Джон Брокингтон (слева) от Green Bay Packers и Лео Хайден от Minnesota Vikings. Двое других Баккейцев, вышедших в первом раунде, — это Джек Татум в составе команды «Окленд Рэйдерс» и Тим Андерсон в составе команды «Сан-Франциско 49ers». (AP Photo / Gene Herrick)

«Я был молодым человеком, который никогда не уезжал из Дейтона, штат Огайо, и теперь внезапно люди пишут мне из разных уголков страны, чтобы взять автограф», — сказал он. «Может, у меня 50 штук в неделю.”

6-футовый 210-фунтовый Хайден был ключевым игроком в глубокой команде штата Огайо. В 10 играх в качестве старшего в 1970 году он пробегал 767 ярдов и в среднем набирал 5,8 ярда за перенос. Он был вторым в команде в рывке позади Джона Брокингтона, у которого было 1142 ярда.

«У Льва было тело, как у греческого бога», — сказал Брокингтон. «Он был от природы хорошо сложен. И он был быстр, и он мог блокировать, так что это то, что вам нужно в спине ».

Брокингтон был взят «Грин Бэй» под номером 9 на драфте 1971 года и провел три сезона по 1000 ярдов.Хайден был выбран 15 пиками позже, чтобы помочь улучшить беговую игру викингов, которая в 1970 году составляла в среднем всего 3,2 ярда на перенос с Биллом Брауном, Дэйвом Осборном, Клинтом Джонсом и Оскаром Ридом.
Лео Хайден (второй слева), раннинбэк, сделанный Миннесотскими викингами в первом раунде драфта НФЛ 1971 года, совершил тачдаун в Роуз Боул, когда штат Огайо обыграл USC 27-16 1 января 1969 года и выиграл национальный чемпионат. чемпионат. Он показан на 50-м воссоединении команды в Колумбусе, штат Огайо, в 2018 году вместе с тремя другими игроками штата Огайо, которые забили в Rose Bowl.Остальные слева — нападающий Джим Роман и бегущие защитники Рэй Джиллиан и Джим Отис. (Любезно предоставлено Лео Хайденом)

«В то время он был лучшим в нашей призывной комиссии», — вспоминал Джерри Рейчоу, тогдашний директор по персоналу «Викингов». «Но штат Огайо был отличной футбольной командой, и проблема в том, чтобы наблюдать за великой командой, состоит в том, что все вокруг них действительно хороши. У них были самые большие, сильные линейные игроки и все такое, и у Лео было много возможностей для бега ».

У Хайдена были типичные для новичков проблемы роста, когда он приехал в Миннесоту, но, похоже, он никогда не поправлялся.Когда он весь сезон 1971 года провел без мяча и был переведен в специальные команды, некоторые списали это на то, что тогдашний тренер Бад Грант склонен не играть с новичками.

«Я не пытаюсь ничего отнять у Лео Хайдена, но я не думаю, что он был чем-то вроде драфта №1», — сказал Осборн. «Вы ожидаете, что выбором №1 на драфте будет такой парень, как Чак Форман (ранний бэк-бэк занял 12-е место в общем зачете в 1973 году), который действительно может вмешаться и изменить ход игры».

Хайден не отрицает, что наркотики сильно повлияли на его игру с викингами.«Он начал употреблять психоактивные вещества в колледже, а затем обратился к тяжелым наркотикам в Миннесоте.

«Я перестал курить травку, курить марихуану и пить сироп от кашля», — сказал Хайден. «Я начал тусоваться с некоторыми кошками (еще будучи новичком викингов), и они стали употреблять кокаин. Вот тогда я и начал. Я употреблял героин в Миннесоте. Если бы это был наркотик, и его можно было нюхать, пить, стрелять, я бы это сделал. Думаю, я употребил достаточно героина, кокаина и других наркотиков, чтобы меня сочли наркоманом ».

Хайден не называл имен, но сказал, что в свой сезон новичка он принимал наркотики с другими игроками Vikings.Хайден, получивший зарплату новичка в размере 11000 долларов, сказал, что тратит около 300 долларов в неделю на наркотики, но часто получал их бесплатно, потому что играл в профессиональный футбол. В то время он был женат, но его жена оставалась в основном в Колумбусе, когда он играл с викингами.

Осборн и Райчоу сказали, что они никогда не знали, что Хайден употребляет наркотики, но Джонс узнал об этом. Он вспомнил один случай, когда он и несколько человек, которых он не назвал, пришли в резиденцию Хайдена и обнаружили, что тот не отвечает.
Лео Хайден, ранбэк, взятый миннесотскими викингами в первом раунде драфта НФЛ 1971 года, в офисе шерифа прихода Орлеана в Новом Орлеане, 19 апреля 2021 года.Сейчас он директор службы волонтеров в офисе шерифа, он выйдет на пенсию и 1 мая станет сотрудником на неполный рабочий день (Филип Стелли / Офис шерифа округа Орлеан)

«У него была передозировка, и мы вывели его голым на улицу и поместили внутрь. снег, а потом он проснулся », — сказал Джонс. «Он был без сознания. Слава богу, он проснулся. Подумайте, как это было бы разрушительно для команды и для всех… если бы он умер ».

Хайден помнит эту историю по-другому.

«(Джонс) не бросал меня в снег, он помог затащить меня в ванну», — сказал Хайден.«И у меня не было передозировки, я просто вышел из нее».

Тем не менее, Хайден сказал, что тогда находился под действием наркотиков. Ни тренерам, ни руководителям команды Vikings об этом эпизоде ​​не сообщили. Грант сказал, что никогда не слышал эту историю, но не отрицал, что тогда были некоторые подозрения относительно образа жизни беглеца.

«Мы внимательно следили за (игроками), и они знают, что за ними наблюдают, но у них есть способы обмануть людей», — сказал Грант. «Они думают, что обманывают людей, но сказать, что мы когда-либо поймали (Хайдена на наркотиках), что мы специально пытались повесить это на него, — нет.Наркотики влияют на вашу способность играть. Он потерял способность играть, будь то наркотики, был ли он недостаточно хорош, какой бы склад ума он ни имел. …. У нас могли быть подозрения, но не было конкретных доказательств наличия наркотиков. Но он был недостаточно хорош ».

Когда Хайден вернулся во второй сезон в «Викингах», Райчоу сказал, что «не добился никакого прогресса». Грант, не колеблясь, резал его.

«Что ж, вы выиграете кое-что, вы проиграете», — сказал Грант, позволив выбору драфта в первом раунде на столь раннем этапе своей карьеры.

Хайден назвал освобождение «плохим» моментом.

«Я знал, что в команде все еще есть люди, которых я был лучше, но я оглядываюсь назад на те годы зависимости, которые, поскольку ты наркоман, нет на свете более мерзкого человека, чем наркоман», — сказал Хайден. . «Причина, по которой они называют это наркотиком, в том, что он превращает вас в одного».

Хайдена подобрал Сент-Луис, но мало что сделал с кардиналами. В четырех играх 1972 года и двух в 1973 году у него было восемь кернов на 11 ярдов и тачдаун, один захват на 17 ярдов и пять ответных ударов на 98 ярдов.

Тем временем его проблемы с наркотиками в Сент-Луисе обострились.

«Кокаин стал моим предпочтительным наркотиком, — сказал он. «Кокаин требует от мастера, чтобы он был у вас каждый день».

Хайден был вырублен «Кардиналами» в 1974 году, завершив свою карьеру в НФЛ всего после 13 игр. После этого он не продержался долго с Chicago Fire. Его брак закончился разводом.

Хайден поехал в Луисвилл, где у него были родственники, и устроился на работу по продаже страховки. Но однажды он был бездомным в течение нескольких месяцев и спал в своей машине, и он регулярно занимался незаконной деятельностью, чтобы получить деньги на наркотики.

«Я сделал кое-что, чем не очень горжусь, а кое-что меня не поймали», — сказал он. «Подлог. Плохие чеки. Просто куча всего. Я выманивал у многих людей кучу денег ».

Закон, наконец, настиг его, когда полиция прибыла в дом в Луисвилле, где он останавливался, и нашла его прячущимся в чулане. В 1982 году сообщалось, что он был приговорен к пяти годам тюремного заключения за подделку чеков на общую сумму 2 891,76 доллара.
Лео Хайден (справа), ранбэк, взятый «Миннесотскими викингами» в первом раунде драфта НФЛ 1971 года, теперь является директором службы волонтеров в офисе шерифа прихода Орлеана в Новом Орлеане.Хайден ранее руководил программой возвращения заключенных в приходскую тюрьму Орлеана. Он показан 19 апреля 2021 года в офисе шерифа вместе с Хуаном Красто, который был сокамерником программы до того, как его выпустили из тюрьмы в 2016 году. (Филип Стелли / Офис шерифа округа Орлеан)

После ношения свитера с номером 22 в Огайо. Штат, 44 года с викингами и 31 с кардиналами, ему дали форму № 88825 в исправительном учреждении штата Кентукки. Но Хайден сказал, что пребывание в тюрьме фактически спасло ему жизнь, потому что он смог пройти программу реабилитации от наркозависимости.

«Это дало мне инструменты, чтобы собрать все воедино», — сказал Хайден, чей предыдущий приговор был осужден за подделку документов и нарушение условий условно-досрочного освобождения. «Я подумал:« Какой будет моя жизнь, если я попаду в тюрьму и выйду из нее? »Я дал торжественную клятву, что больше не вернусь в тюрьму».

Когда Хайден был освобожден из тюрьмы, он обнаружил, что письмо, которое он написал своей матери, было прикреплено к стене в ее доме в Дейтоне, где оно оставалось незадолго до ее смерти в 1997 году.Хейс, который затем ушел в отставку в качестве тренера, помог ему найти работу по продаже автомобилей в Колумбусе.

Хайден, однако, хотел помочь другим. В конце 1980-х годов он устроился на работу консультантом по лечению наркозависимости, работая с «наркоманами, которые не могут найти себе дорогу». Позже он занял должность в Департаменте психического здоровья и наркологии штата Огайо, где работал с заключенными.

Это привело к тому, что в 1990-х годах он получил работу в Чикаго, где в качестве исполнительного директора отдела альтернативных методов лечения для более безопасных сообществ он руководил программой, чтобы помочь ненасильственным преступникам выйти из тюрьмы.Затем он основал программу под названием Национальный центр по борьбе с насилием, чтобы бороться с насилием в городах. И он приобрел репутацию эффективного оратора и ездил в Перу, Южную Африку, Зимбабве, Барбадос, Пуэрто-Рико и во многие штаты США, чтобы работать с заключенными.

«Я завербовал его», — сказал Гусман, когда привез его в Новый Орлеан в 2010 году. «Мы провели общенациональный поиск. Это было отличное предприятие, но он был действительно кем-то ».
Лео Хайден (в центре), ранбэк, взятый «Миннесотскими викингами» в первом раунде драфта НФЛ 1971 года, теперь является директором службы волонтеров в офисе шерифа прихода Орлеана в Новом Орлеане.Хайден ранее руководил программой возвращения заключенных в приходскую тюрьму Орлеана. Он показан в 2014 году на выпускной программе повторного въезда вместе с шерифом округа Орлеан Марлином Гусманом (справа) и неопознанным выпускником. (Любезно предоставлено офисом шерифа округа Орлеан)

Гусман не знал о футбольном прошлом Хайдена, пока не прибыл на собеседование. Его больше всего заинтриговала способность Хайдена поделиться с заключенными своим опытом заключения, а затем переломить его жизнь.

В рамках программы повторного въезда заключенные в приходской тюрьме Орлеана, которые подали заявление и были приняты, прошли 90-дневную программу, прежде чем они могли быть освобождены. Хайден рассказывал им истории о своей жизни и предлагал им советы, как приспособиться к обществу, в том числе советы по финансам и о том, как устроиться на работу.

«У нас были парни, которые сидели в тюрьме от 30 до 40 лет и только собирались вернуться домой», — сказал Хайден о работе с заключенными, совершившими всевозможные преступления, включая убийства.«Многим из этих людей просто нужно было с кем поговорить. У них не было семей ».

Для тех, у кого есть родственники, Хайден работал над воссоединением с ними сокамерников. Программа завершилась выпускной церемонией, на которой заключенные были одеты в шапки и халаты и получили диплом.

Хайден возглавлял многочисленные группы из 60 заключенных на протяжении шести лет, и, по оценкам, он работал с примерно 4 000 заключенных в целом. Одним из них был Хуан Красто, который был заключен в тюрьму после того, как был осужден за хранение кокаина, а затем был освобожден из тюрьмы в феврале 2016 года, отсидев около двух с половиной лет.

«Он вел тот образ жизни, который был у меня раньше», — сказал 40-летний Кусто, который сказал, что продавал кокаин. «Таким образом, мы можем связать друг с другом некоторые вещи, через которые мы прошли. Я имел дело с кокаином. Он имел дело с героином. Так что в основном это уличная жизнь. Поэтому, когда я говорю с ним о вещах, он понимает, откуда я ».

Красто сейчас работает на техобслуживании в офисе шерифа, поэтому он продолжает регулярно видеться с Хайденом. Он благодарит Хайдена за то, что он помог навести порядок в своей жизни.

«Вещь Mr.Лео сказал, что меня запомнили: «Никогда не сдавайся. Независимо от того, что вы делали в прошлом, всегда старайтесь добиться большего в будущем », — сказал Красто.

Программа повторного въезда в конечном итоге была перенесена из офиса шерифа округа Орлеан в другой приход, и работа Хайдена сменилась. Он продолжал разговаривать с заключенными, но его основной задачей стал поиск добровольцев для работы в тюрьме. Он нанял членов мормонской церкви для работы с программой тюремной библиотеки. И прежде чем он устроился на работу координатором волонтеров, он попросил комика и активиста Дика Грегори, который умер в 2017 году, поговорить с заключенными.

Хайден не раз сталкивался с трудностями в первой половине своей жизни, но сказал, что вторая половина прошла отлично. Теперь у Хайдена, который был трижды разведен, есть невеста, Донна Янси, и он готовится переехать в новый дом, поскольку он готовится перейти на работу с частичной занятостью. Его постоянно поддерживают трое своих детей — сыновья Карлос Хайден, 50 лет, Даймиан Хайден-Макгуайр, 42 года, и его дочь, Келан Хайден, 27 лет.

«Мне 72 года, и мои дети пытались заставить меня уйти на пенсию с 65 лет, но я все еще хочу работать 20 часов в неделю», — сказал он.«Я был благословлен. Я был выбран в первом раунде драфта. Но у меня появилась возможность показать (позже в жизни), что я был лучше, чем то, что (люди) могли получить от средств массовой информации ».

Разработка синергетических комбинаций лекарственных препаратов для восстановления чувствительности к антибиотикам у устойчивых к лекарствам микобактерий туберкулеза

РЕЗЮМЕ

Туберкулез (ТБ) является ведущей мировой причиной смертности от инфекционных агентов, на которые приходится почти треть всех случаев устойчивости к противомикробным препаратам (УПП) смертей ежегодно.Мы стремились идентифицировать синергические комбинации противотуберкулезных препаратов, способных восстанавливать терапевтическую эффективность против лекарственно-устойчивых мутантов возбудителя, Mycobacterium tuberculosis. Мы исследовали комбинации, содержащие известные ингибиторы трансляции, спектиномицин (SPT) и фузидиевую кислоту (FA), или фенотиазин, хлорпромазин (CPZ), который нарушает энергетический метаболизм микобактерий. Усиление эффективности цельноклеточного лекарственного средства наблюдалось в комбинациях SPT-CPZ. Этот эффект был потерян против M.tuberculosis, у которого отсутствует эффлюкс-насос главного фасилитатора суперсемейства (MFS), Rv1258c. Примечательно, что комбинация SPT-CPZ частично восстанавливала эффективность SPT против SPT-устойчивого мутанта, несущего точечную мутацию g1379t в rrs , кодирующем микобактериальную 16S рРНК. Комбинации SPT с FA, которые нацелены на фактор элонгации G микобактерий, проявляли потенцирующую активность против M. tuberculosis дикого типа. Более того, эта комбинация оказывала умеренный потенцирующий эффект против мутантов, устойчивых как к FA, так и к SPT.Наконец, сочетание SPT с передовыми противотуберкулезными агентами, рифампицином (RIF) и изониазидом, привело к усилению активности in vitro и ex vivo против как лекарственно-чувствительного M. tuberculosis, так и RIF-монорезистентного мутанта rpoB S531L. . Эти результаты подтверждают полезность новых комбинаций усиливающих лекарств для восстановления чувствительности к антибиотикам штаммов M. tuberculosis, несущих генетическую устойчивость к любому из соединений-партнеров.

ВВЕДЕНИЕ

Растущая распространенность туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ-ТБ), определяемого как устойчивость к передовым противотуберкулезным препаратам изониазиду (INH) и рифампицину (RIF), требует срочной разработки и внедрения новых антимикобактериальных препаратов и терапевтические стратегии (1, 2).Ряд противотуберкулезных препаратов в настоящее время находится в стадии разработки, а несколько других находятся на стадии продвинутой доклинической разработки (3). Однако за последние 40 лет, за исключением бедаквилина (BDQ) и деламанида, противотуберкулезные препараты не применялись в клинической практике (4). Следовательно, необходимо изучить новые варианты решения проблемы лекарственной устойчивости.

Новые комбинированные схемы, включающие стандартные противотуберкулезные препараты и перепрофилированные препараты, представляют собой логичный подход, особенно в тех случаях, когда новый препарат-партнер уже одобрен для других клинических показаний (5–7).Недавние успехи в понимании физико-химических свойств, которые определяют распределение лекарств в сложной тканевой и клеточной (микро) среде (8, 9), вместе с улучшенными методами быстрого выбора множества потенциально синергических партнеров-лекарств in vitro и in vivo (8 , 10–12), указывают на потенциал для рационального развития новых комбинированных подходов. Это важно, поскольку это может противоречить давнему мнению о том, что следует избегать разработки комбинаций из-за сложностей, присущих обеспечению одновременной и устойчивой доставки оптимальных соединений-партнеров к одному и тому же целевому сайту (11).Влияние существовавшей ранее лекарственной устойчивости на полезность новых комбинаций лекарств представляет собой дополнительную проблему и вызывает особую озабоченность, когда эти комбинации включают современные противотуберкулезные агенты первой линии. Чтобы свести к минимуму риски воздействия на человека эффективной монотерапии, необходимо признать вероятное наличие устойчивости к отдельным лекарствам и разработать обоснованные комбинированные подходы к лекарственной терапии. Они должны включать в себя несколько атрибутов, помимо простого выбора отдельных молекул на основе их биологической активности в качестве отдельных агентов (13).

В этом исследовании мы использовали спектиномицин (SPT) в качестве якорного соединения в сочетании с другими экспериментальными антибиотиками и существующими противотуберкулезными агентами первой линии. SPT — это аминоциклитоловый антибиотик, который ингибирует синтез белка, нарушая взаимодействия мРНК с 30S рибосомой (14). В отличие от других антибиотиков аминоциклитола (включая гентамицин и канамицин [KAN]), SPT не является ототоксичным (15) и широко используется при лечении инфекций Neisseria gonorrhoeae у пациентов, которые не переносят лечение первой линии (16).С точки зрения дизайна новой схемы, SPT было показано в комбинированных скринингах против M. tuberculosis для синергизма с несколькими различными классами антимикобактериальных соединений, как in vitro, , так и в модели макрофагов (10). К сожалению, основной причиной, подрывающей его полезность в качестве единственного агента, является то, что SPT подвержен активному оттоку M. tuberculosis — наблюдение, которое послужило основанием для элегантного решения в области медицинской химии при разработке спектинамидов (SPD) как производных, «устойчивых к оттоку». противотуберкулезные антибиотики (17–19).Известно также, что спектинамиды взаимодействуют с различными классами антибиотиков (11), причем молекулы спектинамида свинца, такие как 1599, проявляют активность в отношении штаммов M. tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью и действуют синергетически с существующими и экспериментальными противотуберкулезными препаратами in vivo (11, 20). Однако разработка подходящих составов спектинамида для терапевтической доставки остается препятствием на пути продвижения этих соединений в качестве новых противотуберкулезных агентов (21, 22).

Мы исследовали полезность потенцирующих комбинаций, закрепленных SPT, для обхода лекарственной устойчивости и потенциального восстановления (частичной) восприимчивости там, где генетически устойчивые к лекарственным средствам мутанты уже существуют для одного из соединений-партнеров.Мы применили комбинированные скрининги с использованием (i) хлорпромазина (CPZ), фенотиазина, сложный и нерешенный механизм действия, включающий нарушение цепи переноса электронов микобактерий (23), вовлеченный в ингибирование оттоком насоса (24), и (ii) фузидовая кислота. (FA), ингибитор трансляции с продемонстрированной (хотя и умеренной) активностью in vitro (25, 26). FA был выбран из-за его потенциала для репозиции в качестве противотуберкулезного агента и потому, что он обладает уникальным механизмом действия, в частности, ингибированием синтеза бактериального белка путем связывания с фактором элонгации G (EF-G) (27).Усиливающий противомикробный эффект эффект ЖК с другими антибиотиками, включая передовой противотуберкулезный препарат этамбутол (EMB), а также его отсутствие перекрестной резистентности к другим классам антимикробных препаратов послужили дополнительной мотивацией для нашего выбора ЖК (12, 28). . Путем тестирования этих комбинаций против лекарственно-чувствительных M. tuberculosis h47Rv и выбранных мутантов, устойчивых к лекарственным средствам, мы исследовали новые потенцирующие комбинации и продемонстрировали полезность разработки эффективных комбинаций против бацилл, несущих уже существующую генетическую устойчивость к любому из партнерских лекарств.Кроме того, эта работа показала, что добавление SPT в качестве третьего агента к существующей комбинации противотуберкулезных препаратов первой линии RIF и INH восстанавливает активность in vitro против определенных мутантов M. tuberculosis до МЛУ.

РЕЗУЛЬТАТЫ

CPZ усиливает активность SPT, ингибируя отток, опосредованный Rv1258c. Комбинация SPT и CPZ ранее сообщалась как синергетический эффект против Mycobacterium smegmatis (29). При тестировании против M. tuberculosis h47Rv дикого типа (рис. 1a) та же комбинация дала суммарное значение фракционной ингибирующей концентрации (ΣFIC), равное 0.09 (таблица 1), подтверждая сильную синергию (30). Мы исследовали, является ли этот эффект результатом CPZ-опосредованного нарушения активности эффлюксного насоса главного фасилитатора суперсемейства (MFS), Rv1258c, который участвует в врожденной устойчивости к SPT (18). Мы выполнили анализы в виде шахматной доски с использованием дефектного по оттоку мутанта ΔRv1258c («tap»), который использовался при разработке спектинамидов (SPD) (18) и его комплементарного производного ΔRv1258c pCRS4. Как мутант ΔRv1258c, так и комплементарный мутант показали одинаковую МИК ₉₀ 22 мг / л для CPZ (рис.1 и таблица 1), в то время как мутант ΔRv1258c был сверхчувствителен к SPT, демонстрируя примерно в 6 раз более низкое значение MIC ₉₀ , равное 3,9 мг / л (рис. 1b и таблица 1; см. Также таблицу S1 в дополнительном материале), как наблюдалось. ранее (31). Примечательно, что синергизм, обнаруженный при воздействии комбинации CPZ и SPT на M. tuberculosis дикого типа (рис. 1a), был устранен у мутанта ΔRv1258c (рис. 1b), что дало значение ΣFIC 0,75 (таблица 1), но был восстановлен в дополненном штамме ΔRv1258c pCRS4 (рис.1c) с ΣFIC 0,12 (таблица 1). Предыдущие исследования не сообщили о значительных изменениях транскрипции Rv1258c в ответ на лечение CPZ (32). Таким образом, наши наблюдения показали, что лечение CPZ отменяет опосредованную оттоком внутреннюю резистентность к SPT у M. tuberculosis дикого типа в зависимости от Rv1258c, возможно, в результате CPZ-опосредованного ингибирования энергетического метаболизма (23).

Рис. 1.

Ингибирование опосредованного Rv1258c оттока SPT путем добавления CPZ. Комбинации CPZ и SPT применялись в анализах шахматной доски против M.tuberculosis h47Rv (a), мутант ΔRv1258c (b), мутант, комплементированный ΔRv1258c pCRS4 (c), и штамм SPT ^r (d). Подавление роста бактерий оценивали в двух независимых экспериментах с помощью анализа резазурина на основе флуоресценции. Пунктирная горизонтальная линия указывает на 90% -ное ингибирование, а данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения для двух независимых биологических повторов.

ТАБЛИЦА 1

Исследование потенциального синергизма между SPT и CPZ против различных штаммов M. tuberculosis посредством расчета FIC и суммы FIC

CPZ синергизирует с соединениями, отличными от SPT, но усиление SPT возникает исключительно из CPZ-опосредованного ингибирования Rv1258c.Чтобы определить, является ли наблюдаемый синергизм специфическим для SPT или может ли он применяться к другим антимикобактериальным агентам, CPZ применяли в качестве якорного соединения в комбинированных анализах с панелью противотуберкулезных антибиотиков различных классов и механизмов действия (см. Таблицу S2 в дополнительном документе). материал). Из восьми соединений, протестированных с CPZ, четыре продемонстрировали четкую синергию (ΣFIC ≤ 0,5) следующим образом: препараты первой линии, RIF и INH, которые дали ΣFIC 0,37 и 0,5, соответственно, и бедаквилин (BDQ) и налидиксовая кислота, оба из которых дали ΣFIC ≤0.25. Напротив, не наблюдалось потенцирования с KAN или фторхинолонами, ципрофлоксацином (CIP) и левофлоксацином (LEV), все из которых дали ΣFIC> 0,5.

В рамках дополнительного подхода мы также исследовали, был ли потенцирующий эффект, наблюдаемый с комбинацией SPT-CPZ, уникальным для CPZ. С этой целью мы проанализировали SPT в сочетании с расширенной панелью антимикобактериальных агентов (см. Рис. S2 и таблицу S3 в дополнительном материале). Было обнаружено, что SPT взаимодействует только с 2 из 11 протестированных соединений, а именно: эритромицином (ERY), макролидом, нацеленным на рибосомы, и верапамилом (VER), катионным амфифилом, который первоначально считался M.ингибитор оттока от туберкулеза, но недавно было показано, что он нарушает функцию мембран (33). RIF, ингибитор микобактериальной РНК-полимеразы, был чуть выше порога, определяющего синергетическую активность.

Чтобы установить, приводит ли ингибирование опосредованного Rv1258c оттока к наблюдаемым синергическим эффектам соединений, мутант ΔRv1258c тестировали на гиперчувствительность к соответствующей группе противотуберкулезных агентов (фиг. S3 и таблица S1 в дополнительном материале). Спектинамид 1599 имел одинаковую МИК ₉₀ для обоих M.tuberculosis h47Rv и мутант Rv1258c, что отражает его успешную модификацию, позволяющую избежать оттока, опосредованного Rv1258c (18). Из других 11 протестированных соединений только SPT был связан с гиперчувствительностью у мутанта с нокаутом Rv1258c, возвращая значение МИК ₉₀ 0,39 мг / л по сравнению с значением МИК ₉₀ от 62 до 125 мг / л по сравнению с дикими животными. -тип штамма. В сочетании эти результаты убедительно подтверждают вывод о том, что синергизм, обнаруживаемый с комбинацией CPZ-SPT, возникает в результате CPZ-опосредованного ингибирования Rv1258c.

Комбинация CPZ-SPT частично восстанавливает чувствительность SPT у SPT-устойчивого мутанта. Спонтанный SPT-устойчивый мутант (SPT ^r ), несущий точечную мутацию g1379t в микобактериальной 16S рРНК, rrs , был связан с a> 64-кратное увеличение SPT MIC ₉₀ (см. Таблицу S1). Напротив, активность CPZ оставалась на уровне концентрации дикого типа для этого штамма, что соответствовало механизму действия CPZ, который не зависел от ингибирования rrs (34).В то время как мутант SPT ^r был устойчив к SPT при концентрациях> 248 мг / л в отсутствие CPZ, комбинации, использующие CPZ при суб-MIC ([CPZ] ≤ 11,1 мг / л) восстанавливали чувствительность SPT, по крайней мере частично ( Рис. 1г). Эти результаты предполагают способность синергических комбинаций (частично) восстанавливать активность лекарственного средства против мутантных штаммов, генетически устойчивых к любому из соединений-партнеров.

Оценка синергизма с SPT и фузидовой кислотой, двумя антибиотиками, действующими на механизм трансляции микобактерий.Систематическое применение комбинаций лекарств может выявить синергетические взаимодействия. Одна из форм синергии возникает, когда лекарство (а), которое нарушает физиологию нормальной клетки, запускает (компенсаторные) клеточные реакции, которые, в свою очередь, могут влиять (усиливать) активность других лекарств (35). Николс и др. продемонстрировали, что синергическое взаимодействие между сульфаметоксазолом и триметопримом было результатом действия двух препаратов, направленных на биосинтез тетрагидрофолата (36). Имея это в виду, комбинация, содержащая SPT и FA — ингибиторы трансляции, которые действуют на дискретных стадиях процесса элонгации, — была протестирована против M.tuberculosis и два устойчивых штамма, мутанты FA ^r и SPT ^r . Выделение спонтанных мутантов FA ^r in vitro дало единственный штамм на 25 × MIC FA с частотой ∼10 ^-8 . Полногеномное секвенирование выявило замену c1384t (h562Y) в fusA1 ( Rv0684 ), кодирующую существенный фактор элонгации G (EF-G) микобактерий (37). Остаток гистидина высоко консервативен у многих видов бактерий; следовательно, используя структуру Thermus thermophilus в качестве шаблона (38), можно сделать вывод, что M.tuberculosis h562 соответствует T. thermophilus h558 (39), мутации которого, вероятно, изменяют карман для связывания FA (40). В анализах МИК мутант h562Y постоянно давал МИК ₉₀ ≥25 мг / л, подтверждая наследственный FA ^r (таблица 2).

ТАБЛИЦА 2

Исследование потенциального синергизма между SPT и FA против различных штаммов M. tuberculosis посредством расчета FIC и суммы FIC

Имея эти штаммы, мы оценили взаимодействие между SPT и FA и, кроме того, оценили является ли эта комбинация синергической по отношению к родительскому, чувствительному к лекарству M.tuberculosis h47Rv — может противодействовать существовавшей ранее генетической устойчивости к любому соединению. Комбинация SPT и FA показала значение ΣFIC 0,50 (таблица 2) против h47Rv дикого типа; при добавлении ЖК с суб-МПК ([ФА] = 0,16 мг / л) MIC ₉₀ SPT демонстрировал ∼4-кратное снижение с 62 мг / л до 16,3 мг / л (рис. 2a), Р <0,001. FA в субингибиторной концентрации ([FA] = 0,32 и [FA] = 0,16 мг / л) усиливал активность SPT ([SPT] = 62 мг / л) против мутанта SPT ^r .Ингибирующий эффект значительно отличался от результатов, наблюдаемых с аналогичными концентрациями SPT в отсутствие FA ([FA] = 0 мг / л), P <0,001 (фиг. 2b). Хотя рассчитанная сумма FIC не удовлетворяла критерию «синергизма» (ΣFIC ≤ 0,5) (таблица 2), эффект был отмечен и воспроизводился в двух независимых биологических повторностях (рис. 2b). Примечательно, что та же самая комбинация не показала повышенной активности против мутанта FA ^r (фиг. 2c), что убедительно свидетельствует о том, что FA была основным фактором в комбинации SPT-FA.Сводка ингибирующих эффектов комбинаций CPZ-SPT и FA-SPT представлена ​​в таблице 3.

FIG 2

Взаимодействие in vitro между SPT и FA. Комбинации SPT и FA применяли в анализах шахматной доски против M. tuberculosis h47Rv (a) дикого типа, мутанта SPT ^r (b) и мутанта FA ^r (c). Жизнеспособность бактерий оценивали с помощью флуоресцентного анализа резазурина. Пунктирные горизонтальные линии указывают на 90% ингибирование, а данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения для двух независимых биологических повторов.

ТАБЛИЦА 3

Резюме активности лекарств in vitro против штаммов M. tuberculosis h47Rv

Подтверждение того, что интенсивности флуоресценции коррелируют с показаниями плотности клеток. доказательства, подтверждающие заявленные результаты. С этой целью был проведен 96-луночный антимикобактериальный анализ с выбранной панелью препаратов, имеющих разные механизмы действия (см.рис.S4 в дополнительном материале). Эксперименты проводились с использованием репортерного мутанта h47Rv :: GFP, в котором экспрессия флуорофора является конститутивной (41). После 8 дней инкубации в присутствии 2-кратных разведений антимикробных агентов определяли интенсивности флуоресценции зеленого флуоресцентного белка (GFP) и резазурина, и параллельно записывали соответствующие показания оптической плотности. Значения соответствующих интенсивностей флуоресценции и оптической плотности при 600 нм (OD ₆₀₀ ) переводили в процент ингибирования.Сильное согласие было обнаружено при сравнении методов GFP и OD ₆₀₀ со стандартным считыванием резазурина (рис. S4), что подтверждает использование анализа резазурина как для определения MIC, так и для определения FIC.

Комбинация из трех препаратов, включающая SPT, RIF и INH, усиливает активность in vitro против M. tuberculosis. Предположение о том, что синергические комбинации могут быть эффективно применены для преодоления существующей лекарственной устойчивости, было дополнительно изучено с использованием SPT в сочетании с передовыми антибиотиками. -ТБ агенты РИФ и ИНХ.В двумерном (2D) попарном скрининговом анализе мы оценивали комбинации двух препаратов: RIF, INH и SPT. Комбинация RIF-INH не показала взаимодействия (см. Рис. S5a в дополнительном материале), в то время как суб-MIC INH (0,125 мг / л) и RIF (0,003 мг / л) воспроизводимо приводили к умеренному (2-кратному) снижению. при эффективной концентрации SPT от 125 мг / л до 62 мг / л (рис. S5b и c). Чтобы усилить потенциальный эффект SPT, был проведен трехмерный (3D) комбинированный анализ, в котором RIF и INH титровались против уменьшающихся суб-MIC ₉₀ концентраций SPT (1/2 ×, 1/4 ×, 1 / 8 ×, 1/16 × и 1/32 × MIC ₉₀ ), используя формат, показанный на рис.S1b в дополнительном материале. При тестировании против лекарственно-чувствительного M. tuberculosis h47Rv, RIF при суб-MIC ([RIF] = 0,003 мг / л) плюс SPT как при 1/4 ×, так и 1/2 × MIC приводили к 8-кратному снижению эффективного концентрация INH от 0,25 мг / л до 0,03 мг / л (см. рис. S6 в дополнительном материале). Анализ кинетики уничтожения показал, что добавление SPT к комбинации RIF-INH вызывало снижение примерно на 1 log ₁₀ единиц ( P <0,001) в жизнеспособной популяции бациллов после 8-дневного воздействия комбинации из трех препаратов (см. Инжир.S7a в дополнительном материале). Напротив, когда тестировали нокаут-мутант ΔRv1258c «tap», RIF при суб-MIC ([RIF] = 0,003 мг / л) плюс 1/2 × MIC SPT приводил только к ~ 3-кратному снижению эффективной концентрации INH от 0,25 мг / л до 0,09 мг / л (рис. S7b), что снова указывает на причастность Rv1258c к внутренней устойчивости M. tuberculosis к антибиотикам.

Комбинация RIF-INH-SPT активна в макрофагах, инфицированных M. tuberculosis, и против монорезистентных штаммов пре-MDR.tuberculosis выживает и реплицируется в макрофагах (42), синергизм RIF-INH плюс SPT был оценен против внутриклеточных бацилл в клетках THP-1, инфицированных M. tuberculosis. Эта комбинация из трех лекарственных средств показала ингибирующую активность при 1 × MIC ₉₀ комбинированных лекарственных средств (см. Фиг. S8 в дополнительном материале). Напротив, ингибирующий эффект снижался, когда аналогичные концентрации каждого лекарства применялись индивидуально или когда стандартная комбинация RIF-INH использовалась без SPT. Внутриклеточная активность этой тройной комбинации была дополнительно подтверждена подсчетом КОЕ (см.рис.S9 в дополнительном материале), который показал 2-log ₁₀ снижение КОЕ / мл при применении 1 × MIC ₉₀ RIF-INH-SPT по сравнению с необработанным контролем.

Для оценки эффективности RIF-INH-SPT против известных штаммов, устойчивых к лекарственным средствам, комбинация была протестирована против двух мутантов M. tuberculosis до MDR следующим образом: RIF-монорезистентный мутант, несущий общий аллель rpoB S531L и INH-монорезистентный штамм, несущий мутацию -c15t в промоторной области inhA , которая придает низкий уровень устойчивости к INH (рис.3). Повторные эксперименты с шахматной доской показали, что для мутанта rpoB ^S531L (изменение S-на-L в положении 531 RpoB) добавление 1/2 × MIC SPT к планшету RIF-INH приводило к снижению эффективные концентрации как RIF (от 20 до 10 мг / л), так и из INH (от 0,25 до 0,03 мг / л) (рис. 3a и b), что указывает на частичное восстановление лекарственной чувствительности в присутствии SPT. Повышенная восприимчивость наблюдалась также для мутанта INH ^r , хотя и в меньшей степени: концентрация RIF ниже МИК 0.01 мг / литр и INH 2,5 мг / литр достигли 80% ингибирования бактерий (рис. 3c и d).

Фиг. 3.

Активность против штаммов M. tuberculosis до МЛУ. In vitro активность RIF-INH против RIF ^r M. tuberculosis rpoB ^{мутант S531L} в отсутствие (a) или в присутствии (b) 1/2 × MIC SPT и против INH ^r M tuberculosis inhA мутант в отсутствие (с) или в присутствии (d) 1/2 × MIC SPT. Пунктирная горизонтальная линия указывает на 90% -ное ингибирование, а данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения для двух независимых биологических повторов.

ОБСУЖДЕНИЕ

Несмотря на недавние многообещающие заявления (43), способность бактерий к приобретению устойчивости с помощью нескольких механизмов означает, что трудно, возможно, даже невозможно устойчиво преодолеть устойчивость к антибиотикам (44). Для временного обхода резистентности можно использовать различные подходы, обеспечивая эффективность антибиотиков, несмотря на то, что резистентные организмы уже существуют в инфицированной популяции. Комбинированная терапия представляет собой один из таких подходов.

В предыдущем исследовании Chen et al. продемонстрировали синергетическое взаимодействие между SQ109 и RIF при тестировании против RIF ^r изолятов: при 0,5 × MIC SQ109 был способен увеличивать активность RIF против de facto устойчивых организмов дозозависимым образом (45). Недавно Yang et al. сообщили о повышенной эффективности комбинации имипенем-колистин против множественных лекарственно-устойчивых бактерий Enterobacter cloacae in vitro и на модели инфекции (46).Относительно мало исследований было проведено, чтобы проиллюстрировать связь между потенцированием лекарственных взаимодействий и способностью конкретной комбинации лекарств преодолевать существовавшую ранее генетическую резистентность. В клиническом исследовании Ankomah et al. предположили, что лекарственные препараты, действующие синергетически, могут предотвратить неудачу лечения, даже если в начале терапии присутствуют бактерии, устойчивые к одному из этих препаратов (47). Наши исследования взаимодействия между SPT и CPZ подтвердили восприимчивость SPT к оттоку, опосредованному Rv1258c, наблюдение, которое предполагает, что следует продолжать усилия по модификации SPT, в том числе с помощью новых химических модификаций, которые создают устойчивость к оттоку (18).

Мы проверили чувствительность мутанта ΔRv1258c к небольшой группе антимикобактериальных соединений с различными механизмами действия и обнаружили, что только SPT был связан с повышенной восприимчивостью. Подобный фенотип гиперчувствительности был достигнут против M. tuberculosis h47Rv дикого типа посредством химического усиления SPT с использованием CPZ в качестве комбинированного агента. Однако потенцирующий эффект CPZ не был специфическим для SPT и вместо этого наблюдался для нескольких других агентов. Это предполагает вероятность того, что CPZ может отключить более одного механизма внутренней резистентности у M.туберкулез. Необходима дальнейшая работа, чтобы установить точный механизм для каждого соединения, с имеющимися на сегодняшний день доказательствами причастности множественных потенциальных систем оттока к внутренней устойчивости к INH, RIF и фторхинолонам (48). Для BDQ транспортер семейства RND с несколькими субстратами MmpS5-MmpL5, по-видимому, является сильным кандидатом на основании предыдущих отчетов (49).

Наши результаты показали синергизм между FA и SPT против лекарственно-чувствительных бактерий через механизм, не зависящий от ингибирования оттока, наблюдаемого с SPT-CPZ.Примечательно, что та же самая комбинация FA-SPT проявляла усиленный ингибирующий эффект против генотипически подтвержденного мутанта SPT ^r по сравнению с мутантом FA ^r . Хотя нет окончательного объяснения этому открытию, мы предполагаем, что относительная эффективность FA (∼0,63 мг / л) против чувствительного к лекарству родительского h47Rv по сравнению с таковой SPT (∼50 мг / л) может повлиять на FA-SPT. комбинация против мутанта SPT ^r , восстанавливающая восприимчивость. Подобный эффект не был очевиден в комбинации SPT-FA против мутанта FA ^r из-за пониженной активности FA и высокого MIC ₉₀ SPT.Интересно влияние отдельных активных лекарств на синергию.

Другие объяснения потенцирования включают устойчивое лекарственное давление, возникающее в результате взаимодействия лекарств, что приводит к увеличению эффективной дозы комбинации лекарств. Более того, некоторые исследования продемонстрировали, что лекарственная восприимчивость патогенов может быть значительно увеличена в результате снижения эффективности откачивающего насоса либо путем генетических манипуляций (50), либо путем добавления ингибиторов оттока (51, 52).Клиническая значимость этого открытия заключается в том, что, несмотря на наличие бактериальной резистентности к комбинированному партнеру, все же возможно достичь оптимальных терапевтических результатов за счет использования соответствующих сильнодействующих комбинаций лекарственных средств.

Предыдущая работа продемонстрировала потенциал комбинации из трех препаратов по сравнению с индивидуальной схемой или схемой из двух препаратов (53, 54). Недавно Tekin et al. сообщили, что комбинации трех разных антибиотиков часто могут преодолеть антимикробную устойчивость к антибиотикам, даже если ни один из трех антибиотиков по отдельности — или даже два из трех вместе — не эффективны (55).Кроме того, на основании исследований лекарственного взаимодействия Ramon-Garcia et al. предположили, что синергетическая активность комбинации триплетов может иметь мультипликативный эффект (10). Здесь SPT был развернут как часть схемы из трех препаратов, которая также включала RIF и INH, два препарата, которые составляют краеугольный камень лечения туберкулеза. Другие исследования показали, что взаимодействие между RIF и INH против M. tuberculosis не имеет взаимодействия или является умеренно антагонистическим (8, 56). Включение SPT в эту схему лечения было подкреплено сообщениями о том, что 24 из 70 протестированных случайных комбинаций были синергетически активны в отношении M.смегматис (10). Это предполагает наличие большого количества неизученных синергетических комбинаций. Примечательно, что SPT проявлял синергизм с несколькими соединениями, как in vitro, , так и ex vivo (10), даже несмотря на то, что соединение имеет высокий MIC ₉₀ против M. tuberculosis при введении отдельно (18).

В анализе комбинации трех лекарственных средств синергизм проявлялся, когда субингибирующие концентрации (1/2 × и 1/4 × MIC) SPT титровались в среду, содержащую RIF и INH. Этот результат хорошо коррелировал с результатами кинетики time-kill.Однако анализ «time-kill» показал, что ингибирующий эффект взаимодействия трех лекарственных средств был бактериостатическим (снижение ≤3 log ₁₀ КОЕ), а не бактерицидным. Это наблюдение показывает, что комбинация RIF и INH — двух бактерицидных препаратов, наиболее эффективных против активно делящихся клеток, — проявляет бактериостатические эффекты. Кроме того, ингибирование роста, вызванное бактериостатическим лекарственным средством, SPT, приводит к общему статическому эффекту, когда лекарственное средство используется в сочетании с бактерицидным лекарственным средством.Другие исследования показали, что при аналогичных взаимодействиях результирующий эффект обеспечивает более эффективный клиренс при более низких концентрациях (31).

В попытке использовать синергию для потенциально оптимальных результатов лечения было проведено исследование взаимодействия RIF-INH плюс SPT на мутантах rpoB и inhA . Мутант RIF ^r rpoB имел значение MIC более чем в 2000 раз, чем MIC ₉₀ для чувствительных к лекарствам M. tuberculosis. Примечательно, что добавление 1/2 × MIC SPT восстанавливало частичную эффективность лекарственного средства против этого устойчивого мутанта.Как и в случае с лекарственно-чувствительным штаммом h47Rv, в настоящее время отсутствует механистическое объяснение синергизма, наблюдаемого при использовании комбинации RIF-INH плюс SPT против мутанта rpoB . INH нацелен на биосинтез оболочки микобактериальных клеток, возможно, увеличивая проникновение SPT в бациллы. Однако сам по себе доступ не обязательно способствует синергетическому взаимодействию. Chen et al. сообщили о синергии между SQ109, предполагаемым ингибитором клеточной оболочки, и RIF (45). Напротив, EMB, который также влияет на синтез оболочки микобактериальных клеток, не проявляет синергизма с RIF (57).

Предыдущие отчеты показали, что RIF является эффективным индуктором цитохрома P450 (CYP 450), суперсемейства гемсодержащих ферментов, участвующих в биосинтезе таких соединений, как стерины, стероиды и жирные кислоты, а также в детоксикации ксенобиотиков. и химикаты (58). RIF был связан с индукцией CYP как у людей, так и у M. tuberculosis (59). Повышенные уровни CYP связаны с лекарственной устойчивостью из-за повышенной скорости выведения лекарств путем метаболизма и детоксикации.INH, наоборот, подавляет CYP у M. tuberculosis (59). Эта способность INH ингибировать CYP может способствовать синергии комбинации RIF-INH плюс SPT, когда активная форма INH не выводится быстро внутри M. tuberculosis и когда SPT действует путем дальнейшего снижения активности CYP.

В схемах лечения есть перспектива комбинирования SPT с RIF-INH. SPT вводится внутримышечно для достижения терапевтических концентраций в сыворотке около 100 мг / л через 1 час после однократной дозы 2 г.Более чем 4-кратное повышение его эффективности в рамках тройной комбинации SPT-RIF-INH, как показывают эти данные, потенциально может позволить использовать пероральный препарат, что является важным форматом доставки при назначении лечения амбулаторным больным туберкулезом. Таким образом, эти результаты in vitro и ex vivo предполагают, что тройная комбинация RIF-INH плюс SPT может быть эффективным терапевтическим вариантом для лечения как лекарственно-чувствительных, так и устойчивых инфекций M. tuberculosis. Они также подтверждают растущий объем доказательств, подтверждающих полезность стратегий лекарственного потенцирования для улучшения результатов лечения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Химикаты и реагенты. Все химические вещества и растворители были приобретены у Sigma-Aldrich. Рабочие растворы всех антимикробных препаратов готовили в диметилсульфоксиде (ДМСО).

Бактериальные штаммы и условия культивирования. Лабораторный штамм M. tuberculosis h47Rv, его производные мутанты и репортерный штамм, который ранее использовался в высокопроизводительном скрининге противомикробных препаратов и постоянно экспрессирует зеленый флуоресцентный белок (GFP), h47Rv pMSP: : eGFP (41), хранились в морозильных камерах.Штаммы инокулировали в стандартную среду Миддлбрука 7H9 с добавлением 10% олеиновой кислоты, альбумина, декстрозы и каталазы (OADC) (Difco) и инкубировали в виде стационарных культур при 37 ° C в течение приблизительно 3 дней, пересеивали и инкубировали до тех пор, пока плотность культуры не стала OD. ₆₀₀ из ∼0.5. Второй мутант-репортер, M. tuberculosis h47Rv: 🙁 pSMYC :: mCherry) (60), который конститутивно экспрессирует флуорофор mCherry, выращивали в среде, содержащей 50 мг / л гигромицина. Суспензии клеток разбавляли до ожидаемой конечной концентрации 10 ⁵ клеток / мл во время инокуляции в микропланшет для анализов MIC.

Анализы лекарственной чувствительности. Микротитровальный анализ резазурина (REMA) использовали для определения чувствительности лекарств к штаммам M. tuberculosis, как описано (61). Вкратце, 2-кратные серийные разведения соединений выполняли на прозрачных 96-луночных планшетах с круглым дном, используя среду 7H9-OADC. Культуры M. tuberculosis, выращенные до OD ₆₀₀ 0,5 (~ 10 ⁸ клеток / мл) и разведенные в 1000 раз, добавляли в равном объеме до общего объема 100 мкл на лунку. Планшеты запечатывали в пакеты с застежкой-молнией и инкубировали при 37 ° C в течение 7 дней в соответствии с руководящими принципами EUCAST (62) и опубликованной литературой (63), в которой рекомендуется считывать чашки MIC через 7 и 14 дней после инокуляции.Добавляли краситель резазурин и планшеты инкубировали еще 24 часа. Показания флуоресценции при длинах волн возбуждения и излучения 540 и 590 нм, соответственно, регистрировали с использованием планшет-ридера BMG Labtech POLARstar Omega (BMG Labtech, Оффенбург, Германия) или планшет-ридера SpectraMax i3x (Molecular Devices). Наименьшая концентрация лекарственного средства, которая ингибировала рост по крайней мере на 90%, была определена по кривой доза-ответ; эта концентрация была определена как значение MIC ₉₀ .

Тесты шахматной доски.(i) 2D-шахматная доска. Стандартные «двумерные» (2D) взаимодействия лекарство-лекарство определяли титрованием в шахматном порядке в 96-луночном планшете (см. рис. S1a в дополнительном материале). 2D-микроразбавление проводили, как описано (45) с небольшими изменениями. Вкратце, первое лекарственное средство (A), которое необходимо серийно разбавить, распределяли (2 мкл) по оси x (столбцы с 3 по 11; строка B) при начальной концентрации, в 100 раз превышающей конечную концентрацию в лунке, и 2 мкл на лунку второго лекарственного средства (B) последовательно распределяли по оси y (от ряда B до H) при начальной концентрации, в 100 раз превышающей конечную концентрацию в 96-луночном микротитровальном планшете.Первый столбец (столбец 1) и последний столбец (столбец 12) содержали контроли без лекарств (с 1% ДМСО в качестве разбавителя) и контрольную концентрацию лекарственного средства, дающую максимальное ингибирование, соответственно. Второй столбец от B2 до h3 и первый ряд от A3 до A11 содержали индивидуальные лекарственные средства, таким образом, обеспечивая МИК для каждого лекарственного средства отдельно в каждом анализе (на каждом планшете). Планшеты помещали в пакеты с застежкой-молнией и инкубировали при 37 ° C в течение 7 дней. Затем добавляли краситель резазурин и планшеты инкубировали еще 24 часа. Видимое изменение цвета с синего на розовый указывает на рост бактерий, а визуализированная МИК была определена как самая низкая концентрация лекарственного средства, которая предотвращала рост (при которой изменение цвета не происходило) (61).Показания флуоресценции (возбуждение, 544 нм; эмиссия, 590 нм) получали с использованием планшет-ридера BMG Labtech POLARstar Omega (BMG Labtech, Offenburg, Германия) или планшет-ридера SpectraMax i3x (Molecular Devices). Среднее значение флуоресценции для лунок «максимального ингибирования» (столбец 12) вычитали из всех остальных лунок для контроля фоновой флуоресценции. Процент ингибирования определяли как 1 — (единицы флуоресценции в тестовой лунке / средние единицы флуоресценции лунок с максимальным ингибированием) × 100 на 8 день после инкубации.Самая низкая концентрация лекарственного средства, оказывающая ингибирование на 90%, рассматривалась как MIC _90. Кроме того, синергизм интерпретировался в соответствии с суммой фракционной ингибирующей концентрации (ΣFIC). Долевую ингибирующую концентрацию для каждого соединения рассчитывали следующим образом (64): FIC _A — (МИК соединения A в присутствии соединения B) / (МИК только соединения A), где FIC _A представляет собой фракционное ингибирующее концентрация соединения A. Аналогичным образом рассчитывали FIC для соединения B.ΣFIC был рассчитан как FIC _A + FIC _B . Синергия определялась значениями ΣFIC ≤0,5, антагонизмом ΣFIC> 4,0 и отсутствием взаимодействия значениями ΣFIC от 0,5 до 4,0 (30).

(ii) Трехмерная шахматная доска. В комбинациях трех лекарств («трехмерных» [трехмерных]) (рис. S1b), микроразбавления для первых двух препаратов были первоначально настроены в основном в соответствии со стандартным протоколом анализа двухмерной шахматной доски, описанным выше. . Затем добавляли третье лекарство (2 мкл) в начальной концентрации, в 100 раз превышающей конечную концентрацию в лунке, в виде наложения при пяти субингибирующих концентрациях в диапазоне от 1/32 до 1/2 от МИК для одного лекарства.Лунка А2 на всех планшетах содержала только третье лекарственное средство, обеспечивая МПК для одного лекарственного средства для третьего лекарственного средства в каждом анализе (набор из 5 планшетов). После инокуляции культурой в лог-фазе, OD ₆₀₀ 0,5 (~ 10 ⁸ клеток / мл) M. tuberculosis, 50 мкл в каждую лунку, планшеты помещали в пакеты с застежкой-молнией и инкубировали в течение 7 дней при 37 ° C перед добавлением резазурина. Планшеты дополнительно инкубировали в течение 24 ч, и результаты считывали на считывающем устройстве для планшетов BMG Labtech (возбуждение, 544 нм; эмиссия, 590 нм) (63).Процент ингибирования рассчитывали, как описано выше.

Анализ макрофагов. (i) Клеточная культура и поддержание. Человеческие промоноцитарные клетки THP-1 поддерживали в среде RPMI 1640 (Sigma) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) (Invitrogen) при начальной плотности 8 × 10 ⁵ клеток / мл. при 37 ° C в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ . Перед посевом клеток оценивали жизнеспособность методом исключения трипанового синего (65). Созревание клеток THP-1 в макрофаги индуцировали добавлением 200 нМ PMA (форбол 12-миристат 13-ацетат; Sigma) в среду для культивирования клеток на 24 часа.Затем дифференцированные макрофаги трижды промывали предварительно нагретым фосфатно-солевым буфером (PBS) для удаления PMA и дополняли средой для культивирования клеток.

(ii) Инфекция макрофагов и медикаментозное лечение. Для проверки эффективности лекарств в макрофагах, 5 × 10 ⁴ клеток THP-1 / лунку (конечный объем 100 мкл) в 96-луночных планшетах с плоским дном для культур тканей дифференцировались в макрофаги. Для заражения макрофагов экспоненциально растущую культуру M. tuberculosis h47Rv: 🙁 pSMYC :: mCherry) собирали центрифугированием и дважды промывали PBS.Осадок ресуспендировали в PBS и пропускали через 5-мкм фильтр для получения суспензии одноклеточных бацилл. Плотность бактериальной суспензии оценивали путем измерения OD при 600 нм, что соответствует OD ₆₀₀ от ~ 0,5 до 1 × 10 ⁸ КОЕ / мл. Инфекционная среда включала среду для культивирования клеток, содержащую количество бактерий, необходимое для достижения множественности инфекции (MOI) 5: 1 (5 бацилл на каждую клетку THP-1) (66). Клетки макрофагов покрывали инфекционной средой и инкубировали при 37 ° C в 5% CO ₂ в течение 3-часового фагоцитарного периода.Затем клетки осторожно и тщательно промывали предварительно нагретым PBS для удаления внеклеточных бактерий. Клетки из трех лунок лизировали, добавляя Triton X-100 (0,05% в PBS), и лизат высевали на 7h20 для подсчета КОЕ для необработанного нулевого дня. Клетки в остальных лунках обрабатывали указанным антибиотиком либо отдельно, либо в комбинации при 1 × MIC ₉₀ или 5 × MIC ₉₀ , как определено в жидкой культуре. Гигромицин в концентрации 50 мг / л добавляли в среду для культивирования клеток для всех лунок для поддержания плазмиды, экспрессирующей mCherry.

(iii) Измерение флуоресценции. Флуоресценцию репортера mCherry (возбуждение, 590 нм; испускание, 610 нм) измеряли в различные моменты времени на планшет-ридере BMG Labtech.

(iv) Подсчет КОЕ. Для оценки количества живых бацилл после лекарственной обработки необработанные и обработанные лекарственным средством инфицированные M. tuberculosis клетки лизировали в Triton X-100 (0,05% в PBS) на 2, 4 и 6, и серийные разведения клеточного лизата высевали на агар 7h20. Колонии подсчитывали через 3-4 недели инкубации при 37 ° C.

Статистический анализ. Статистический анализ проводился с использованием Prism 9.0.0.121 (GraphPad). Средние значения сравнивали с помощью дисперсионного анализа (ANOVA) с посттестовой оценкой с использованием теста Даннета или Бонферрони. Значения P сокращены следующим образом: *, P <0,05; **, P <0,01; ** * , P <0,001.

БЛАГОДАРНОСТИ

Исследование, представленное в этой публикации, было поддержано Отделом стратегических партнерств в области инноваций в области здравоохранения (SHIP) Южноафриканского совета медицинских исследований (SAMRC) за счет средств, полученных от Департамента научных инноваций Южной Африки (К.К. и Д.Ф.У.). Мы признательны за поддержку Кейптаунскому университету, SAMRC (для KC и VM), Южноафриканской инициативы научных кафедр (для KC) и Департамента научных инноваций, осуществляемых через Национальный исследовательский фонд, схему Фонда Шлюмберже «Факультет будущего». (EK и AW) и Исследовательскому совету Норвегии (DFW). Финансирование предоставили: Университет Кейптауна, Исследовательский фонд Новартис, Южноафриканский совет по медицинским исследованиям, Группа стратегических партнерств в области инноваций в области здравоохранения Южноафриканского совета медицинских исследований, Инициатива южноафриканских кафедр научных исследований Министерства науки и инноваций, осуществляемая через Южноафриканский национальный исследовательский фонд, стипендии Карнеги-Меллона и Исследовательский совет Норвегии.

Мы благодарим JA Aínsa за предоставление нокаутного мутанта M. tuberculosis ΔRv1258c («tap») и его дополненного производного, RE Lee за предоставление запасов спектинамида 1599, Krupa Naran за советы по анализу шахматной доски и Mandy Mason за критический обзор исследования рукопись.

Мы заявляем об отсутствии конфликта интересов.

• Авторские права © 2021 Omollo et al.

Патрик Радден Киф в «Империи боли»

Подписка: Apple Podcasts | Spotify | Брошюровщик | Как слушать

Новая книга Патрика Раддена Кифа «Империя боли» — это история семьи Саклеров, стоящих за Purdue Pharma, создателей мощного обезболивающего Оксиконтина, ставшего корнем опиоидного кризиса в мире. Соединенные Штаты.Одна из тем, охваченных расследованием Кифа, — это то, что компания знала и когда, когда кризис начал разворачиваться.

«Одна вещь, которую я смог окончательно установить в книге, — это то, что на самом деле существует этот документальный след, действительно начинающийся в 1997 году, так что всего через год после выпуска препарата торговые представители отправили сообщения, в которых говорилось: «Эй, у нас тут проблема. Люди злоупотребляют этим препаратом », — говорит Киф. «И высшие руководители компании обсуждают на очень высоком уровне, некоторые из которых впоследствии под присягой свидетельствовали, что ничего не знали об этом до начала 2000 года.Что касается графика, очень сложно согласовать то, что они всегда говорили публично, и то, что я мог подтвердить с помощью внутренних документов ».

Элизабет Иган, редактор Book Review, на этой неделе ведет подкаст, чтобы обсудить «Что будет дальше» Джоан Томпкинс, последний выбор для Group Text, нашей ежемесячной колонки для читателей и книжных клубов. Роман начинается со смерти двух старшеклассников и становится загадкой, когда мы встречаем Эванджелин МакКенси, беременную 16-летнюю девушку, имеющую связь с мертвыми мальчиками.

«Я мать троих подростков, и я постоянно ищу книгу, которая заставит меня немного лучше понять, как мало я знаю о том, что происходит в головах моих детей в любой момент времени», — говорит Иган. «В этой книге было что-то обнадеживающее, как бы странно это ни звучало, потому что она начинается с этой ужасной трагедии. Но на самом деле это книга о жизни «.

Также в выпуске на этой неделе Тина Джордан оглядывается на историю книжного обозрения в этом году его 125-летия, а Лорен Кристенсен и Джон Уильямс рассказывают о том, что они читали.Памела Пол — ведущая.

Вот книги, обсуждаемые в разделе «Что мы читаем» на этой неделе:

Нам хотелось бы услышать ваши мысли об этой серии и о подкасте Book Review в целом. Вы можете отправить их по адресу [email protected] .

Ремень Ar 15

Во время скорострельного теста на расстоянии 50 ярдов от сидячего положения я смог произвести пять выстрелов из AR-15 в 3-дюймовый круг в среднем за 14 секунд.Используя скоростной строп, я смог … Крепление для ремня MAGPUL MOE (MSA) MAG504: Адаптер MAGPUL MS1 MS3-QD (система MS1) 21,95 долл. США. 59,95 долларов США. 24,95 долларов США. 20,95 долларов США: Адаптер MAGPUL MS1 MS4 (система MS1) Стропа Magpul MS1 с мягкой подкладкой: Стропа Magpul MS1, компонент многоцелевой стропной системы: Стропа Magpul MS3 GEN2, MAG514-BLK: 24,95 доллара США. 56,95 долларов США. 34,95 долларов США. 49,95 $: Стропа Magpul MS3 Single QD GEN2 …

Концевая пластина стропы Ar-15. Двусторонняя одноточечная вертикальная петля. Наша двусторонняя центральная вертикальная петля AR-15, без привязки, торцевая пластина адаптера стропа 180 градусов, изготовлена ​​из цельной стали для прочности и…A1-AR15 Quick Set Sling 90 долларов — черный 100 долларов (для винтовок с фиксированными вертлюгами) Стропы модели AR-15 могут использовать вертлюги уже 1-1 / 4 дюйма. Если ваши вертлюги уже, сообщите нам, и мы подрежем язычки по размеру (минимум 3/4 дюйма). Нам нужно знать измерение внутренней ширины.

Наша двусторонняя центральная вертикальная петля AR15, без перемычек, торцевая пластина адаптера стропы 180 градусов изготовлена ​​из цельной стали для обеспечения прочности и долговечности. Он легко устанавливается за считанные минуты и заменяет оригинальную заводскую торцевую пластину приемника.Slingster® был разработан как самый модульный ремень для винтовки на рынке. Его быстро регулируемый прорезиненный язычок позволяет быстро переводить ваше оружие из надежно закрепленного в боевое состояние. Обновлен новым язычком Ferro Concepts Slingster® Pull Tab, который улучшает ранее использовавшийся ITW Zipline Orbit p

Mar 21, 2017 · This AR -15 крепление для ремня относительно легкое, легко монтируется за секунды, является симметричным, а Daniel Defense включает в себя быстро снимаемый вертлюг. Убедитесь, что вы заметили это; некоторые думали… Ремень для винтовки — один из самых важных аксессуаров, которые вы можете купить для своей AR 15. Ремень не только поможет вам переносить винтовку, как чемодан AR15, но также может повысить точность стрельбы.

Инструкции по установке Quick Release Tac-Sling для винтовок AR-15, M-16 и M-14. Шаг 6. Проденьте конец основной стропы через металлическое D-образное кольцо на задней лямке. Полоса 1,5 дюйма должна проходить с левой стороны оружия. Tactical Tailor, 2916 107th St S. Lakewood WA 98499 В Интернете по адресу www.