Днк фрагментация норма: 🤰 Фрагментация ДНК сперматозоидов — цена, сдать тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов

🤰 Фрагментация ДНК сперматозоидов — цена, сдать тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов

О детях начала задумываться поздно: хотелось пожить «для себя», да и моей карьере декрет не пошел бы на пользу. Когда мне было 34, решили с мужем «пора».

Первые полгода без предохранения — полет нормальный. Потом начали волноваться. Потом перепробовали все — от диет и стояния вверх ногами после секса, до обследования в лучших клиниках. Врачи разводят руками. Дальше 4 протокола ЭКО за полтора года в 2 клиниках. На выходе — одна замершая беременность во втором протоколе.

И тут у меня опустились руки. Начались проблемы с мужем — он гораздо раньше, чем я, предлагал родить детей, и вот теперь стал пилить меня, мол, из-за тебя упустили время… Короче, неизвестно чем бы все это кончилось, если бы не Его Величество Случай.

Как-то летом приехала к маме на дачу, а там старая знакомая с мужем и двумя карапузами ковыряется. Я ее знала если не с пеленок, то с песочницы точно. У нас дачи рядом, поэтому нас на лето родители все время к бабушкам туда отвозили. А потом уже стали сами туда к родителям ездить или с компаниями. В общем, не близкие подруги, конечно, но и не чужие. Позвала она меня вечерком в гости. Посидели мы с ней, выпили вина, смотрю я на Ирку, на ее малышей, и тут меня «развезло». Расплакалась, рассказала ей все. Оказалось, что у Ирки тоже были проблемы по женской части, и дети, оказывается, «Экошки», двойняшки. Она посоветовала мне своего врача.

Первый прием. Репродуктолог Анна Владиславовна Морозова. Мне как-то сразу с ней было психологически комфортно и спокойно. Как говорится, на одной волне, нет этого обычного врачебного проглядывающего «если ничего не понимаешь, молчи и делай как я тебе говорю». Все обсудили. Она сказала правильную вещь — «Бесплодие неясного генеза — это не значит, что причины нет. Это значит что ее пока не нашли. Будем искать». Протокол, 11 клеточек, 8 эмбрионов, 5 с хорошей морфологией. А дальше понятно — отбор эмбрионов по полу, и с первой попытки успешная беременность. И вот я, 39-летняя «молодая мамаша», сейчас сижу на кухне, варю обед и приглядываю за своей Анькой…

Анна Владиславовна, слов нет, чтобы выразить, как я Вам благодарна. А всем девчонкам совет — не затягивайте. А то времени может и не хватить.

Определение степени фрагментации ДНК сперматозоидов

Фрагментация ДНК сперматозоидов, как  один из факторов нарушения мужской фертильности, открыт не так давно — около 10 лет назад,  и патофизиологические механизмы процесса фрагментации ДНК продолжают изучаться. Однако установлено, что показатель фрагментации ДНК сперматозоидов имеет определенное диагностическое и прогностическое значение в супружеских парах с нарушением репродукции.

Фрагментация ДНК сперматозоидов – это наличие одно- и двухцепочечных разрывов молекулы ДНК, нарушение целостности генетического материала сперматозоида. Именно в этой молекуле закодирована и хранится вся генетическая информация, которая при зачатии передается ребенку. И чем больше в молекуле ДНК таких разрывов, тем меньше вероятность оплодотворения яйцеклетки сперматозоидом.

Причинами фрагментации ДНК  могут явиться отклонения при образовании и созревании сперматозоидов, апоптоз (естественный процесс гибели, в результате которого сперматозоид распадается на отдельные части), воздействие вредных внешних факторов. Именно такое явление, как  апоптоз объясняет, почему в сперме всегда есть сперматозоиды с разрывами ДНК.

У  здоровых фертильных мужчин  доля сперматозоидов с нарушенной целостностью ДНК составляет примерно 15%. У бесплодных мужчин доля сперматозоидов с фрагментированной ДНК может доходить до 30 %, а в отдельных случаях может подниматься и выше. На показателях спермограммы это обычно не сказывается, однако ряд исследований последних лет обосновывают наличие корреляции между концентрацией сперматозоидов в эякуляте и частотой разрывов ДНК сперматозоида.

Как фрагментация ДНК сперматозоидов влияет на фертильность?

1. Снижается вероятность зачатия.
2. Поврежденный сперматозоид может оплодотворить яйцеклетку, но в большинстве таких случаев уже на ранних стадиях эмбриогенеза могут начаться нарушения, и произойдет самопроизвольное прерывание беременности. Высоким уровнем фрагментированных сперматозоидов довольно часто обусловлено привычное невынашивание беременности.
3. Проблемы могут возникнуть во время ЭКО или ИКСИ. Если будет использован сперматозоид с фрагментированной ДНК, то эмбрион может развиваться неправильно еще до его имплантации в полость матки, и попытки ВРТ с участием такого сперматозоида обречены на неудачу. Отмечено снижение и образования бластоцист, и частота наступления беременности.  

Для определения степени фрагментации проводится специальный анализ — определение степени фрагментации ДНК сперматозоидов.  Существует несколько методик этого анализа, обладающих практически одинаково высокой чувствительностью.

TUNEL метод. Это микроскопическое исследование спермы, цель его — обнаружить сперматозоиды с поврежденной ДНК и посчитать их количество.

SCSA — еще один метод анализа степени фрагментации ДНК сперматозоидов, основан на исследование структуры хроматина с помощью флуоресцентного ДНК-маркера. Окрашенные им сперматозоиды пропускают сквозь лазерный луч, который заставляет клетки светиться разными цветами, в зависимости от степени повреждения ДНК: зеленый – норма, желтый – умеренные дефекты, красный – критические изменения.

Задать вопрос

Правила подготовки:

• Половое воздержание не менее 2 дней и не более недели. Оптимально – 3 суток до сбора эякулята.
• В период подготовки не употребляйте алкоголь, не курите.
• Избегайте перегревания (сауны, бани и т.д.) сроком в течение 72 часов.
• Не принимайте лекарственные препараты, любые, в течение 24 часов, если врачом не указано обратное и нет угрозы жизни из-за прерывания терапии.
• Исключите все физиопроцедуры и рентгенологическое обследование в течение 72 часов.
• Не рекомендуется тестирование сразу же после перенесенного воспалительного заболевания с повышением температуры. Исследование лучше перенести.
• Накануне исследования исключите физические и эмоциональные перегрузки.
• Правильно питайтесь в период подготовки, питьевой режим -1,5-2 литра в день.

Исследование проводится при концентрации сперматозоидов не менее 1 млн/мл и объеме эякулята не менее 1 мл.

Задать вопрос

По результату теста выдается протокол, в котором указан индекс фрагментации ДНК. Индекс отражает процентное соотношение между «здоровыми» и «больными» сперматозоидами.

• индекс фрагментации не превышает 15% от общей численности сперматозоидов — вероятность наступления беременности естественным путем достаточно высока
• индекс фрагментации повышен и находится в пределах от 15% до 30% — шанс естественного оплодотворения возможен, но снижен
• индекс фрагментации от 30% до 50% — возможно оплодотворение с помощью ИКСИ или ЭКО
• индекс фрагментации ДНК сперматозоидов равен 50% и более -даже при использовании репродуктивных технологий наступление беременности маловероятно.

Задать вопрос

ДНК-фрагментация сперматозоидов и невынашивание беременности

По современным данным, около 20% всех беременностей заканчиваются выкидышами или остановкой развития плода (неразвивающаяся беременность). Данные состояния принято называть репродуктивными потерями, в эту группу также входит и внематочная беременность. Если у женщины отмечается 3 и более случаев невынашивания беременности, то говорят о привычном невынашивании беременности, которое требует диагностики и лечения.

До недавнего времени считалось, что причины привычного невынашивания беременности связаны исключительно с «женскими» заболеваниями. Мужской фактор сводился лишь к инфекциям, передаваемым половым путем, однако сейчас были получены новые данные, согласно которым, чем старше мужчина, тем хуже качество спермы (даже если по анализу спермограммы НОРМОЗООСПЕРМИЯ, т.е. норма). На него влияет количество и особенности строения сперматозоидов, а также степень фрагментации их ДНК. Последнему фактору уделяется все больше внимания.

Что такое фрагментация ДНК

Половые клетки являются носителями генетической информации, при этом молекула ДНК «упакована» в них особенным образом. Если говорить простыми словами, то ДНК представляет собой цельную нить, состоящую из двух цепочек, которые скреплены между собой структурными элементами. Только в таком виде возможна передача «правильной» генетической информации.

При воздействии различных факторов (вредные привычки, плохая экология, дефицит витаминов, микро, -макроэлементов, сопутствующие заболевания и др.) связи в молекуле ДНК обрываются, что приводит к нарушению целостности и появлению фрагментов – это и есть фрагментация ДНК.

Стоит отметить, что у здоровых фертильных мужчин в норме определенная часть сперматозоидов имеют фрагментированную ДНК. Если этот показатель меньше 15%, то проблем с зачатием и вынашиванием беременностью не отмечается. Если же количество фрагментированной ДНК превышает 15%, то мужчине необходима консультация специалиста для решения проблемы.

Клиническое значение

У мужчин с высоким показателем фрагментации ДНК сперматозоидов отсутствуют какие-либо симптомы, поэтому заподозрить наличие проблемы невозможно. Клинически данное состояние может проявиться только тогда, когда пара собирается забеременеть, при этом могут наблюдаться следующие состояния:

• низкая частота наступления беременности;
• невынашивание беременности;
• неразвивающаяся беременность;
• рождение детей с врожденными дефектами.

Кроме того, фрагментация ДНК влияет на эффективность вспомогательных репродуктивных технологий (ЭКО), поэтому даже современные методики не всегда могут помочь паре забеременеть.

Причины фрагментации ДНК и методы лечения

Повреждение ДНК сперматозоидов может отмечаться по самым разнообразным причинам. Прежде всего, это первичные факторы, которые влияют на сам процесс сперматогенеза, к ним относятся генетические аномалии и врожденные дефекты. Повлиять на эти причины невозможно. Вторичные факторы связаны с различным внешним воздействием:

• эндокринные заболевания;
• варикоцеле;
• инфекции мочеполовой системы;
• воздействие высоких температур и электромагнитного излучения;
• вредные привычки;
• дефицит витаминов, микроэлементов и макроэлементов;
• дефицит омега-3 жирных кислот;
• повреждение спинного мозга и др.

Именно на устранении вторичных факторов и базируется стратегия по повышению фертильности. Например, было доказано, что лечение варикоцеле положительно влияет на все показатели спермы, в том числе и на количество сперматозоидов с фрагментированной ДНК. В результате увеличивается частота наступления спонтанной беременности и повышается эффективность применения вспомогательных репродуктивных технологий.

Если мужчина принимает лекарственные препараты, которые влияют на сперматогенез (некоторые антибиотики, статины, антидепрессанты и др.), врач может отменить их или подобрать другое лечение. Не менее важным является оптимизация образа жизни и условий труда: мужчина должен отказаться от вредных привычек, контролировать вес, полноценно питаться. Если работа связана с высокими температурами или электромагнитным излучением, то ее необходимо сменить.

Точный план повышения фертильности всегда разрабатывается индивидуально, после комплексного обследования пары. С помощью современных методик можно получить исчерпывающую информацию о состоянии здоровья мужчины и женщины, выявить причины бесплодия и эффективно повлиять на них, увеличив тем самым вероятность наступления беременности.

В нашем центре можно пройти консультацию специалистов по вопросам выявления и коррекции ДНК фрагментации, мы успешно проводим лечение мужчин с таким диагнозом.

Выявление фрагментации ДНК в сперматозоидах, Клиника Пасман

К сожалению, многие пары, откладывая рождение детей  на более успешный, как им кажется,  период жизни, даже не подозревают о том, что у них существуют серьезные проблемы, требующие незамедлительного лечения. Как следствие,  запоздалое лечение зачастую требует много времени, сил, средств, и, конечно же, нервов. Другое дело, что диагностика причин бесплодия существенно улучшилась и за это время в арсенале специалистов появились более совершенные методики и технологии. Так, в «Клинике  Пасман» применяется  большой комплекс  ВРТ,  начинающийся с тщательного обследования, диагностики и лечения самих причин бесплодия.

     Одна из причин мужского бесплодия – фрагментация ДНК сперматозоидов – чаще всего встречается после перенесенных вирусных инфекций, воспалительных заболеваний мочеполовой системы, химиотерапии, отравления организма тяжелыми металлами и даже при регулярном потреблении алкоголя и табакокурении. Поврежденная ДНК сперматозоида может быть причиной очень высокого процента идиопатических  случаев бесплодия, когда результаты исследования эякулята не выходят за рамки нормы. В этом случае  спермальные клетки с поврежденной ДНК могут показывать себя  как нормальные в плане подвижности и концентрации, но при этом не способствовать наступлению беременности. Зато  оплодотворение подобной спермой может привести к мутациям, к нарушению развития эмбриона и прерыванию беременности, поскольку фрагментация ДНК сперматозоидов оказывает серьезное влияние именно на ранние этапы эмбрионального развития. Но не все так печально — восстановление нормального уровня фрагментации ДНК сперматозоидов возможно благодаря врачебной терапии.

     При  этом нужно знать, что, несмотря на возможности медицины, важно не упустить свой шанс стать родителями и обратиться  в «Клинику Пасман» своевременно,  что существенно повысит  шансы на успех. Кстати, к  специалистам  нашей клиники обращаются даже в самых проблемных случаях, в том числе и  после безуспешного лечения у других врачей-репродуктологов.

     Показаниями для проведения исследования по выявлению фрагментации ДНК в сперматозоидах  являются идиопатическое бесплодие, наличие в анамнезе супругов спонтанных абортов и подготовка к применению методов репродуктивных технологий – ЭКО, ИКСИ, инсеминации.

     Стоит подчеркнуть, что перед  процедурой сбора материала необходимо не менее чем 48-часовое воздержание, отказ от алкогольных напитков и лекарственных препаратов, посещения бани или сауны, а также  ультразвуковое излучение. В день, предшествующий выполнению анализа, следует исключить тяжелые физические и психологические нагрузки.

     И помните, что какой бы результат вы не получили, его не следует использовать для самодиагностики и самолечения. Интерпретация результатов содержит информацию исключительно  для лечащего врача, который не только поставит точный диагноз, но и укажет  верный путь к выздоровлению.

Тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов

Тест на фрагментацию ДНК позволяет выявить наличие разрывов цепочки ДНК в головке сперматозоида, которые снижают вероятность наступления беременности и жизнеспособность эмбриона.

Показания для теста

Мужчинам советуют пройти тест на целостность генетического материала в следующих случаях:

• спермограмма с отклонениями;
• у пары долго не получается забеременеть или случаются частые выкидыши, на фоне нормальной спермограммы;
• несколько неудачных попыток ЭКО в анамнезе;
• при подготовке к любой форме экстракорпорального оплодотворения;
• наличие хронических заболеваний мужских половых органов, варикозное расширение вен семенного канатика;
• возраст потенциального отца 40+.

В результате анализа оценивается индекс фрагментации сперматозоидов (DFI или % сперматозоидов с поврежденной ДНК). В норме это показатель не превышает 15%. При DFI выше 30% вероятность наступления беременности и рождения ребенка достоверно снижается.

Исходя из результатов теста, врач сможет либо полностью исключить проблему со стороны мужчины, либо подобрать оптимальную методику ВРТ, в зависимости от степени поражения. Незначительные отклонения иногда поддаются восстановлению при коррекции условий и качества жизни, но может понадобиться специализированное лечение.

Подготовка к тесту на фрагментацию ДНК

Проведение анализа не вызывает сложностей у мужчины. Стандартные рекомендации по подготовке к процедуре сбора эякулята:

• половое воздержание от 2 до 7 дней;
• не принимать никаких лекарственных препаратов;
• ограничить термическое воздействие (посещение бань, саун и пр.)

Очень важно пересмотреть свой образ жизни, отказаться от вредных привычек (алкоголь, табакокурение).

Процедура исследования фрагментации ДНК в сперматозоидах в Evaclinic IVF

Исследование выполняется методом дисперсии хроматина с помощью диагностических наборов Halosperm.

При поступлении эякулята в лабораторию сразу после его разжижения часть образца замораживается при -20оС, в соответствии с рекомендациями производителя диагностического набора, чтобы защитить ДНК от повреждений под воздействием факторов внешней среды. Такие образцы можно хранить до 1 месяца. Непосредственно перед выполнением теста образцы размораживают.

Заключение по результатам исследования выдается в течение 7 рабочих дней.

Высококвалифицированные специалисты клиники репродукции и генетики Evaclinic IVF имеют богатый опыт работы и готовы помочь каждому в вопросах лечения бесплодия.

ЭКО, ДНК, сперма

Анализ фрагментации ДНК в нативных и криоконсервированных спермиях человека 

Петрушко М.П., Пиняев В.И.,  Правдина С.С.,  Чуб Н.Н.

Введение: На долю мужского фактора всех случаев бесплодия приходится 50%. В связи с этим в настоящее время все большее внимание  уделяется нарушениям отцовского генома, причиной которых может быть фрагментация ДНК сперматозоидов, включающая двухцепочечные и одноцепочечные разрывы молекулы ДНК. Кроме того, в методиках репродуктивных технологий все чаще применяется криоконсервирование спермиев человека, поэтому большое значение имеет определение влияния факторов криоконсервирования на уровень фрагментации ДНК.

Цель: Целью данного исследования явилось выяснение частоты фрагментации ДНК в нативных и криоконсервированных спермиях пациентов, участвующих в лечении бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).

Материалы и методы: Технологию ВРТ проводили по общепринятой методике. Изучение фрагментации ДНК проводили методом TUNEL. Исследовали 30 нативных эякулятов (10 — с нормозооспермией, 12 —  олигоастенотератозооспермией и 8 образцов спермиев, полученных при биопсии яичка) и 28 после криоконсервирования (10 — нормозооспермия, 10 — олигоастенотератозооспермия, 8 – эпидидимальных образцов).

Результаты:

Результаты представлены в таблице.

По рекомендации ВОЗ, в норме, процент сперматозоидов с фрагментацией ДНК не должен превышать 30%.

Установлено, что фрагментация ДНК в эякуляторных сперматозоидах существенно выше, чем в тестикулярных.

         Фрагментация ДНК ниже в группе мужчин с нормозооспермией в сравнении с  олигоастенотератозооспермией, таким образом, морфо-функциональные характеристики эякулята могут служить маркером интактной ДНК.

         Факторы криоконсервирования не оказывают существенного влияния на компактизацию ДНК при нормозооспермии, при олигоастенозооспермии этот показатель достоверно выше в криоконсервированных образцах, по-сравнению с нативными.

         Методом снижения риска, который влечет за собой высокий уровень фрагментации ДНК, особенно при плохом качестве бластоцист и неудачных циклах, может служить применение тестикулярных сперматозоидов, поскольку тестикулярные сперматозоиды имеют значительно более низкие показатели фрагментации ДРК, чем эякуляторные.

         Параметр состояния ДНК спермиев имеет самостоятельное диагностическое и прогностическое значение для пациентов с бесплодием, прибегающим к ВРТ. Несмотря на то, что механизмы образования разрывов не до конца ясны, исследование фрагментации ДНК сперматозоидов повысить информативность анализа спермы и служить эффективным прогностическим инструментом, выявляющим мужской фактор нарушения фертильности.

Фрагментация ДНК сперматозоидов (метод TUNEL)

Артикул: 01041

Стоимость анализа

в лаборатории:

Обычный

9 990руб

стоимость указана без учета стоимости забора биологического материала

Добавить в корзину

Для диагностики нарушения мужской фертильности одним из исследований является фрагментация ДНК сперматозоидов. Генетическая целостность спермы имеет решающее значение для оплодотворения и нормального развития эмбриона, а также для успешной имплантации и снижения риска выкидыша.

Готовность результатов анализа

Обычные*: 15 р. д.

Дата сдачи анализа:
Дата готовности:

*не считая дня сдачи.

Где и когда можно сдать

• Будни: ДУБРОВКА: с 8.00 до 19.30 Без записи! Сдача с 15.00 до 19.30 только при оплате через интернет-магазин. В комментарии к заказу укажите дату и время сдачи. ВОЙКОВСКАЯ, ПОДОЛЬСК: по записи!
• Выходные: ДУБРОВКА: с 9.00 до 17.00 Без записи! Сдача с 15.00 до 19.30 только при оплате через интернет-магазин. В комментарии к заказу укажите дату и время сдачи. ПОДОЛЬСК: по записи!

Изменения в графике работы

Подготовка к анализу

Спермограмма и фрагментация сперматозоидов

Сперма сдается путем мастурбации, через 3-5 дней полового воздержания. Нежелательно посещение бани, сауны, прием алкоголя, а также проведение анализа на фоне лечения. С каждым дополнительным днем воздержания (до 1 недели) объем семени увеличивается на 0,4 мл, концентрация сперматозоидов на 10-15 миллионов, а общее количество сперматозоидов на 50-90 млн. Подвижность и морфология сперматозоидов не изменяется в течение 5-7 дней воздержания, но при более длительном периоде отмечается снижение подвижности сперматозоидов.

Методы выполнения и тесты

метод TUNEL

Файлы

Скачать образец результата анализа
 

Для чего это нужно

Благодаря целостности ДНК осуществляется здоровая передача генетического материала будущим поколениям. Доказано, что основные параметры спермограммы – количество, подвижность и морфология сперматозоидов – не всегда являются индикаторами статуса фертильности мужчины.

Фрагментация ДНК сперматозоидов – нарушение целостности молекул ДНК мужских половых клеток. Фрагментация ДНК приводит к снижению частоты наступления беременности, нарушению оплодотворения и развития эмбрионов, увеличению частоты прерывания беременности. Высокий процент ДНК фрагментации может привести к бесплодию у мужчин и неудачам ЭКО.

Показания к сдаче анализа:

• 
  бесплодие в супружеской паре;
• 
  привычное невынашивание беременности;
• 
  подготовка к вспомогательным репродуктивным технологиям (ВРТ), в т.ч. ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение), ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида), инсеминация;
• 
  неудачные попытки ЭКО;
• 
  обнаружение отклонений в спермограмме.

Факторы, способствующие увеличению степени фрагментации ДНК:

• 
  внешние факторы: возраст старше 40 лет, ожирение, частота эякуляций, злоупотребление саунами/банями, вредные привычки;
• 
  внутренние факторы: хронические и острые воспалительные заболевания урогенитальной системы, состояния после лучевой и/или химиотерапии, варикоцеле, нарушение дозревания сперматозоидов в придатках яичек.

В лаборатории ЦИР фрагментация ДНК сперматозоидов проводится двумя методами:

• 
  Метод TUNEL (Transferase mediated dUTP Nick End Labeling) является наиболее распространенным и современным методом определения степени фрагментации ДНК. Метод основан на маркировке флуоресцентным дезоксиуридином свободных двухцепочечных концов ДНК с применением фермента концевой дезоксинуклеотидил транферазы (terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT).

• 
  Метод SCSA (Sperm Chromatin Structure Assay) или определение структуры хроматина по Эвенсону. Исследование проводят с помощью флуоресцентного ДНК-маркера. Сперматозоиды с денатурированной ДНК количественно подсчитываются с использованием проточной цитометрии.

Нормой считается обнаружение в материале менее 15% фрагментированных сперматозоидов.

Условия сдачи анализа

1. Необходим весь эякулят, собранный путем мастурбации в стерильный пластиковый контейнер после 3-5 дней полового воздержания. 
2. Накануне исключить прием алкоголя, лекарственных препаратов (по согласованию с врачом), посещение бани/сауны, желательно исключить тяжелые физические и психологические нагрузки, а также вне болезни.  
3. 
   Допустим сбор биоматериала вне клиники, но с соблюдением всех правил сбора и транспортировки при температуре около 37^○С в течение 30 минут (максимум до 1 часа).

Как сдать анализы в Лабораториях ЦИР?

Для экономии времени оформите заказ на анализ в Интернет-магазине! Оплачивая заказ онлайн, Вы получаете скидку 10% на весь оформленный заказ!

У Вас есть вопросы? Напишите нам или позвоните +7 (495) 514-00-11. По анализам Вы можете задать вопрос на нашем форуме и обратиться на консультацию к специалисту.

Анализ результатов мужской фертильности | Анализ ДНК спермы

Анализ результатов мужской фертильности | Анализ ДНК спермы | Экзамен

Точные тесты измеряют повреждение ДНК сперматозоидов, которое может быть значительным фактором, влияющим на вашу фертильность.

Важно понимать:
• Высокое повреждение ДНК сперматозоидов означает плохое качество спермы.
• Низкое повреждение ДНК сперматозоидов означает хорошее качество спермы.

Точный результат теста показывает три различных показателя повреждения ДНК (фрагментацию) по сравнению с плодородным эталонным диапазоном.

Показатели ДНК вашей спермы:

Таблица сравнения

График, показывающий степень повреждения ДНК в вашем образце по сравнению с базой данных Examen Fertile *.Большинство сперматозоидов фертильных мужчин имеют низкий уровень повреждений. У бесплодных мужчин больше сперматозоидов с умеренными или высокими повреждениями.

Среднее повреждение ДНК

Среднее количество повреждений ДНК на один сперматозоид в вашем образце. Это сводная мера «типичного» количества повреждений ДНК в вашем образце.

0–26% — Вы находитесь в диапазоне фертильности
26–100% — Вы находитесь за пределами диапазона фертильности и имеете повышенный риск бесплодия и выкидыша.

Низкое повреждение ДНК

Процент сперматозоидов с ДНК хорошего качества
74 — 100% — Вы находитесь в пределах фертильного диапазона
Менее 74% — Вы находитесь за пределами диапазона фертильности и имеете повышенный риск бесплодия и выкидыша.

Высокое повреждение ДНК

Процент сперматозоидов с ДНК низкого качества
0 — 4% — Вы находитесь в пределах фертильного диапазона.
5 — 100% — Вы находитесь за пределами фертильного диапазона и имеете повышенный риск бесплодия и выкидыша.

* Диапазон Examen показывает количество повреждений ДНК, обнаруженных у фертильных мужчин. Он был разработан путем сравнения группы мужчин, у которых успешно родились дети в течение года, с группой мужчин, проходящих лечение бесплодия.Граница контрольного диапазона представляет собой точку, которая наиболее четко различает фертильных и бесплодных мужчин.

Можете ли вы улучшить ненормальный результат?

Сильно поврежденная ДНК сперматозоидов иногда связана с такими факторами образа жизни, как курение, алкоголь, рекреационные наркотики, анаболические стероиды и плохое питание. Это также может указывать на медицинскую проблему, такую ​​как варикоцеле (вариокозная вена на мошонке) или инфекция.

Принять положительные меры:

Сделать:

• Поговорите со специалистом по мужской фертильности: Он / она часто может помочь вам улучшить качество вашей спермы с помощью простых амбулаторных вмешательств.
• Бросить курить: Табак токсичен для сперматозоидов. Выкуривание более 20 сигарет в день снижает количество и подвижность сперматозоидов, а также производит свободные радикалы, которые повреждают ДНК сперматозоидов.
• Ограничьте употребление алкоголя: Более 2 пинт пива или 1 большой стакан вина в день увеличивают риск бесплодия.
• Откажитесь от наркотиков: Каннабис влияет на способность сперматозоидов находить яйцеклетку, не говоря уже об оплодотворении ее!
• Ешьте здоровую пищу: Сбалансированная диета имеет много преимуществ для здоровья, и сперматозоиды также нуждаются в питательных веществах.
• Снятие стресса: Стресс производит свободные радикалы, которые могут ограничивать выработку сперматозоидов и влиять на качество ДНК сперматозоидов.
• Сохраняйте спокойствие: Производство спермы лучше всего происходит при более низкой температуре, тесное нижнее белье, компрессионные шорты и длительное сидение или езда на велосипеде могут повредить вашу сперму.

Каждый шаг — это позитивное изменение, поддерживающее здоровье и качество ДНК вашей спермы

Для получения дополнительной информации о том, как улучшить ДНК сперматозоидов, щелкните здесь.

Индекс фрагментации ДНК

(DFI) как показатель качества спермы и фертильности у мышей

2.

Баррат, К. Л. и др. . ДНК сперматозоидов: организация, защита и уязвимость: от фундаментальной науки до клинического применения — отчет о позиции. Hum. Репродукция. 25 , 824–838 (2010).

PubMed
Статья
PubMed Central

Google Scholar

5.

Осман, А., Алсомайт, Х., Сешадри, С., Эль-Тухи, Т. и Халаф, Ю. Влияние фрагментации ДНК сперматозоидов на частоту живорождений после ЭКО или ИКСИ: систематический обзор и метаанализ. Репродукция. Биомед. Интернет: 30 , 120–127 (2015).

CAS
PubMed
Статья
PubMed Central

Google Scholar

8.

Choi, H. Y. et al. . Влияние фрагментации ДНК сперматозоидов на клинические исходы оплодотворения in vitro . Clin. Exp. Репродукция. Med. 44 , 224–231 (2017).

PubMed
PubMed Central
Статья

Google Scholar

21.

Oehninger, S. & Ombelet, W. Пределы текущего тестирования мужской фертильности. Fertil. Стерил. 111 , 835–41 (2019).

PubMed
Статья
PubMed Central

Google Scholar

40.

Le, M. T. et al. .Влияет ли обычное замораживание на фрагментацию ДНК сперматозоидов? Clin. Exp. Репродукция. Med. 46 , 67–75 (2019).

PubMed
PubMed Central
Статья

Google Scholar

Следует ли обычно использовать анализ фрагментации ДНК сперматозоидов при оценке мужского бесплодия? — Malhotra

Необходимость исследования фрагментации ДНК сперматозоидов

Анализ спермы (СА) — краеугольный камень оценки мужского бесплодия.Различия в количестве и качестве сперматозоидов могут сделать СА ненадежным инструментом принятия решений, позволяющих получить представление о бесплодии (1). Следовательно, были предприняты усилия по совершенствованию методов анализа мужской фертильности. В последнее время основные методы исследования сосредоточены вокруг оценки емкости сперматозоидов, функции сперматозоидов, морфологии сперматозоидов и ядра сперматозоидов. Достижения в области исследования мужского бесплодия привели к разработке стратегий оценки качества хроматина сперматозоидов и фрагментации ДНК (2).

ДНК сперматозоидов является жизненно важным компонентом зачатия человека, поскольку повреждение ДНК сперматозоидов может влиять на различные маркеры зачатия, включая качество эмбриона, развитие бластоцисты, имплантацию, беременность и выкидыш (3).

Недавно опубликованная статья Agarwal et al. представил рекомендации по тестированию фрагментации ДНК сперматозоидов (SDF) и обсудил его полезность в качестве диагностического инструмента для оценки мужской фертильности в различных клинических сценариях.Несмотря на недостаточность клинических данных, подтверждающих рутинное использование SDF для оценки фертильности, в рекомендациях Американской урологической ассоциации (AUA) и Европейской ассоциации урологов (EAU) по мужскому бесплодию признается важность фрагментации ДНК в сперматозоидах (4).

Напротив, Комитет по практике Американского общества репродуктивной медицины (ASRM), несмотря на признание взаимосвязи между повреждением ДНК сперматозоидов и другими параметрами спермы, заявляет, что: « недостаточно доказательств, чтобы рекомендовать проверку целостности ДНК сперматозоидов в качестве рутинной процедуры. тест в оценке и лечении бесплодной пары ‘(5).

Методы тестирования на фрагментацию ДНК сперматозоидов

Тесты на фрагментацию ДНК сперматозоидов оценивают качество упаковки ДНК, которая несет важную генетическую информацию о потомстве. Таким образом, тесты отличаются друг от друга и более значимы, чем стандартные параметры спермы (6).

Обычно используемые тесты: анализ одноклеточного гель-электрофореза (Comet), анализ структуры хроматина сперматозоидов (SCSA), анализ мечения концов терминальной трансферазы dUTP (TUNEL) и тест дисперсии хроматина сперматозоидов (SCD или Halo).Эти тесты измеряют различные аспекты повреждения ДНК и имеют разную чувствительность.

Поскольку ни один из предложенных тестов не может дать точного определения конкретных последовательностей ДНК, этот факт мог побудить ASRM не рекомендовать рутинное использование тестов целостности ДНК сперматозоидов при оценке и лечении бесплодной пары (7).

Показания и рекомендации — тестирование SDF

Конкретная полезность SDF в различных клинических сценариях, вероятно, станет полезным справочным материалом для оказания помощи практикующим урологам и репродуктивным специалистам с ограниченными знаниями в области генетики при определении условий, в которых тестирование SDF будет весьма применимо в клинической практике.

Клиническое варикоцеле

В клинических отчетах говорится, что существует определенная связь между SDF и варикоцеле. Учитывая это, для доказательства этого факта было предложено несколько теорий (8).

Исследования, оценивающие уровни SDF у мужчин с варикоцеле, сообщили о заметных уровнях SDF; в то время как варикоцелэктомия снизила уровни SDF, что привело к повышению частоты беременностей, существует очень мало данных, позволяющих понять влияние варикоцеле низкой степени на SDF (9).

Сообщалось о высоком SDF при клиническом варикоцеле, особенно 2 и 3 степени; Сообщалось об улучшении SDF при всех степенях варикоцеле после варикоцелэктомии (4).

Текущие данные свидетельствуют о том, что тестирование на фрагментацию ДНК может позволить клиницистам выбрать кандидатов на варикоцелэктомию среди мужчин с клиническим варикоцеле и параметрами спермы, находящимися на границе с нормальными (4).

Необъяснимое бесплодие, частота естественных беременностей и ВМИ

Высокие уровни SDF наблюдаются у мужчин с нормальными параметрами спермы, что делает уровень SDF ценным показателем статуса мужской фертильности.Исследования показали, что уровни SDF можно использовать в качестве прогностического инструмента при прогнозировании вероятности естественной беременности (9), а высокий SDF дополнительно связан с повторным самопроизвольным абортом (RSA).

Имеются данные, свидетельствующие о более низкой частоте наступления беременности у пациенток с ВМИ с индексом SDF> 30% (10).

Неудачи при экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО) и ИКСИ

Оценка исследований ЭКО предполагает, что SDF незначительно влияет на частоту наступления беременности при ЭКО.Высокий SDF связан с большей частотой невынашивания беременности как при ЭКО, так и при ИКСИ (11).

Использование сперматозоидов из яичек, а не эякулированных сперматозоидов снижает вероятность повреждения ДНК сперматозоидов, поскольку дисульфидное сшивание его хроматина происходит в придатке яичка. Учитывая, что большая часть повреждений ДНК происходит во время прохождения сперматозоидов по придатку яичка. Таким образом, сперма из яичек имеет более низкий SDF, чем эякулированная сперма, и более высокие показатели беременности при ЭКО / ИКСИ могут быть достигнуты с использованием спермы из яичек (12).

Пограничная аномальная (или нормальная) СА с факторами риска

Как указывалось ранее, оксидативный стресс является ключевой патофизиологией мужского бесплодия. Кроме того, несколько факторов образа жизни вызывают мужское бесплодие, вызванное окислительным стрессом. Как и любая другая клетка в организме, сперматозоиды производят меньшее количество АФК на фоне выработки митохондриальной энергии. Антиоксиданты в митохондриях и семенной жидкости помогают уравновесить уровни ROS.Тем не менее, может возникнуть дисбаланс между уровнями АФК и антиоксидантов, что вызовет состояние окислительного стресса, который может повредить ДНК сперматозоидов (13).

Повышенная частота дефектов ДНК сперматозоидов часто связана с пожилым возрастом. Было также показано, что курение оказывает пагубное воздействие на обычные параметры спермы, способность к оплодотворению и риск бесплодия. Курильщики имеют более высокий уровень SDF по сравнению с некурящими. Фрагментация ДНК также явно выше у курильщиков с бесплодием, чем у некурящих людей с бесплодием (14,15).Ожирение также связано с аномальными параметрами спермы (16,17). Воздействие загрязнителей окружающей среды или профессиональное воздействие металлов, таких как свинец и кадмий, связано с мужским бесплодием (18). Хлорорганические загрязнители, такие как полихлорированные бифенилы и метаболиты дихлордифенилтрихлорэтана, связаны с фрагментацией ДНК в сперматозоидах (19). Бисфенол А (BPA), обнаруженный в пластике, может изменять целостность ДНК сперматозоидов, функцию сперматозоидов, оплодотворение и эмбриональное развитие посредством регуляции и / или фосфорилирования белков, связанных с фертильностью, в сперматозоидах (20).

Имеются разумные доказательства вредного воздействия высоких значений SDF у мужчин с пограничными нормальными / аномальными параметрами спермы с помощью нескольких механизмов, описанных выше.

Практическая значимость испытаний SDF

Доказательный подход, рекомендованный Agarwal et al. , демонстрирует, что тестирование SDF дает потенциальную ценность при оценке мужского бесплодия. Доказательства, обсуждаемые в обзоре, показывают, что повышение уровня SDF улучшает частоту наступления беременности и ее исход.

Передовая статья Дробниса и др. обсуждает, что большинство исследований, оценивающих полезность тестирования SDF для диагностики бесплодия, могут иметь несколько недостатков, например, небольшой размер выборки, неадекватный дизайн, неподходящую исследуемую популяцию и неисключение женского бесплодия. Они также были недавно подчеркнуты в отчете о позиции ESHRE и в руководстве Комитета по практике ASRM. Таким образом, существует потребность в стандартизированных методах сравнения бесплодных пар с популяцией мужчин с доказанной фертильностью, а также за исключением случаев женского бесплодия, что подтверждает полезность тестирования SDF.Необходимы будущие исследования, в ходе которых мужчины с положительными и отрицательными тестами SDF будут набирать мужчин и случайным образом назначать им разные виды лечения: выжидательная тактика против IUI против IVF против IVF – ICSI, что будет иметь большое клиническое значение при определении Тестирование SDF как надежный инструмент.

Благодарности

Нет.

Конфликт интересов: Автор не заявляет о конфликте интересов.

Список литературы

1. Esteves SC. Клиническая значимость рутинного анализа спермы и разногласия вокруг критериев Всемирной организации здравоохранения 2010 г. для исследования спермы. Int Braz J Urol 2014; 40: 443-53. [Crossref] [PubMed]
2. Bungum M. Оценка целостности ДНК сперматозоидов: новый инструмент в диагностике и лечении фертильности. Obstet Gynecol Int 2012; 2012: 531042.
3. López G, Lafuente R, Checa MA, Carreras R, Brassesco M.Диагностическая ценность фрагментации ДНК сперматозоидов и большого увеличения сперматозоидов для прогнозирования результатов лечения вспомогательной репродукции. Азиатский Дж. Андрол 2013; 15: 790-4. [Crossref] [PubMed]
4. Agarwal A, Majzoub A, Esteves SC и др. Клиническая полезность тестирования фрагментации ДНК сперматозоидов: практические рекомендации, основанные на клинических сценариях. Перевод Андрол Урол 2016; 5: 935-50. [Crossref] [PubMed]
5. Дробнис Э.З., Джонсон М. Вопрос о тестировании на фрагментацию ДНК сперматозоидов при обследовании мужского бесплодия: ответ на комментарий профессора Льюиса.Reprod Biomed Online 2015; 31: 138-9. [Crossref] [PubMed]
6. Cho CL. Комментарий: тестирование фрагментации ДНК сперматозоидов в действии. Перевод Андрол Урол 2017; 6: S647-8.
7. Lewis SE. Признание тестирования фрагментации ДНК сперматозоидов в клинической оценке мужской фертильности. Reprod Biomed Online 2015; 31: 134-7. [Crossref] [PubMed]
8. Cho CL, Esteves SC, Agarwal A. Новое понимание патофизиологии варикоцеле и его связи с активными формами кислорода и фрагментацией ДНК сперматозоидов.Азиатский Дж. Андрол 2016; 18: 186-93. [Crossref] [PubMed]
9. Evgeni E, Charalabopoulos K, Asimakopoulos B. Фрагментация ДНК сперматозоидов человека и ее корреляция с обычными параметрами спермы. J Reprod Infertil 2014; 15: 2-14. [PubMed]
10. Bungum M, Humaidan P, Spano M и др. Прогностическая ценность параметров анализа структуры хроматина сперматозоидов (SCSA) для результатов внутриматочной инсеминации, ЭКО и ИКСИ. Репродукция человека 2004; 19: 1401-8. [Crossref] [PubMed]
11. Робинсон Л., Галлос И.Д., Коннер С.Дж. и др.Влияние фрагментации ДНК сперматозоидов на частоту выкидышей: систематический обзор и метаанализ. Репродукция Человека 2012; 27: 2908-17. [Crossref] [PubMed]
12. Эстевес С.К., Роке М., Гарридо Н. Использование сперматозоидов для интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов у мужчин с высокой фрагментацией ДНК сперматозоидов: SWOT-анализ. Азиатский Джей Андрол 2017. [Epub перед печатью]. [Crossref] [PubMed]
13. Agarwal A, Virk G, Ong C и др. Влияние окислительного стресса на мужскую репродуктивную функцию.Всемирный журнал J Mens Health 2014; 32: 1-17. [Crossref] [PubMed]
14. Taha EA, Ezz-Aldin AM, Sayed SK и др. Влияние курения на жизнеспособность сперматозоидов, фрагментацию ДНК, активные формы кислорода и цинк у мужчин с олигоастенотератозооспермией и варикоцеле. Андрология 2014; 46: 687-91. [Crossref] [PubMed]
15. Шарма Р., Харлев А., Агарвал А. и др. Курение сигарет и качество спермы: новый мета-анализ, изучающий влияние лабораторных методов исследования человеческой спермы, разработанных Всемирной организацией здравоохранения 2010 года.Eur Urol 2016; 70: 635-45. [Crossref] [PubMed]
16. Tunc O, Bakos HW, Tremellen K. Влияние индекса массы тела на оксидативный стресс в семенной жидкости. Андрология 2011; 43: 121-8. [Crossref] [PubMed]
17. Хаммуд А.О., Гибсон М., Петерсон С.М. и др. Влияние мужского ожирения на бесплодие: критический обзор современной литературы. Fertil Steril 2008; 90: 897-904. [Crossref] [PubMed]
18. Шарма Р., Биденхарн К. Р., Федор Дж. М. и др.Факторы образа жизни и репродуктивное здоровье: контроль фертильности. Репрод Биол Эндокринол 2013; 11: 66. [Crossref] [PubMed]
19. Rignell-Hydbom A, Rylander L, Giwercman A, et al. Воздействие ПХД и p, p’-DDE и целостность хроматина сперматозоидов человека. Environ Health Perspect 2005; 113: 175-9. [Crossref] [PubMed]
20. Рахман М.С., Квон В.С., Ли Дж.С. и др. Бисфенол-А влияет на мужскую фертильность через белки сперматозоидов, связанные с фертильностью. Научный журнал 2015; 5: 9169.[Crossref] [PubMed]

Цитируйте эту статью как: Malhotra V. Следует ли обычно использовать анализ фрагментации ДНК сперматозоидов при оценке мужского бесплодия? Перевод Androl Urol 2017; 6 (Приложение 4): S699-S701. doi: 10.21037 / tau.2017.06.11

Фрагментация ДНК сперматозоидов | Лаборатория врачей

Фрагментация ДНК сперматозоидов

Высокая фрагментация ДНК сперматозоидов связана со снижением частоты естественных беременностей и беременностей при искусственном оплодотворении, а также показателей живорождения.Фрагментация ДНК сперматозоидов также приводит к более высокому уровню выкидышей, как опубликовано в Руководстве ESHRE по рецидивной потере беременности 2017 года. Высокий уровень фрагментации ДНК можно снизить, если подумать о восстановлении варикоцеле, лечении основных инфекций или воспалений, изменении образа жизни или приеме антиоксидантных добавок.

Есть два варианта запроса на фрагментацию ДНК сперматозоидов. Пожалуйста, укажите, относится ли запрос к фрагментации ДНК сперматозоидов с помощью SCSA или COMET.

Анализ структуры хроматина сперматозоидов (SCSA®) [SEXT]

Этот тест позволяет быстро измерить большое количество клеток (от 5000 до 10000 сперматозоидов) в эякуляте.Тест SCSA® отслеживает изменения флуоресценции зонда, акридинового оранжевого, для обнаружения разрывов как одиночных, так и двойных цепей ДНК с помощью проточной цитометрии.

Он был разработан с использованием моделей человека и животных в течение последних 35 лет и является одним из наиболее статистически надежных тестов на фрагментацию ДНК сперматозоидов. Это стандартизированный, утвержденный CLIA тест с высокой воспроизводимостью и низкой вариабельностью. Для теста требуется минимальное количество сперматозоидов примерно 1 миллион / мл.

Анализ спермы COMET® [CMET]

Когда количество сперматозоидов ограничено, фрагментацию ДНК можно эффективно оценить с помощью анализа Comet®, поскольку требуется всего ~ 5000 сперматозоидов. Анализ Comet® использует электрофорез для определения аномальных сперматозоидов и может измерять как одно-, так и двухцепочечные разрывы. В отличие от теста SCSA®, анализ Comet® может быть подвержен вариабельности между наблюдателями и может быть менее статистически устойчивым, поскольку он измеряет низкие количества сперматозоидов от 50 до 100 из каждого образца.

Инструкция по забору образцов ДНК сперматозоидов

Фрагментация ДНК сперматозоидов не является частью комплексного анализа спермы и должна запрашиваться как отдельный тест, код теста SEXT. В идеале образцы спермы должны быть заморожены как можно скорее после разжижения, но не более чем через 60 минут после эякуляции. Образцы должны быть мгновенно заморожены для тестирования фрагментации ДНК сперматозоидов.

Если образцы готовятся другой лабораторией, две криопробирки, содержащие не менее 0.Требуется 25 мл спермы. Замороженные образцы могут быть отправлены в TDL или взяты TDL по договоренности и должны сопровождаться соответствующими данными пациента, количеством сперматозоидов и формой согласия GDPR.

Для точной регистрации ДНК требуется минимум 1 миллион / мл.

(PDF) Взаимосвязь между жизнеспособностью сперматозоидов и скоростью фрагментации ДНК

некроспермия. Используя пороговое значение 42%, мы обнаружили, что частота случаев некроспермии составляет 16,1% в нашей популяции, состоящей из

фертильных мужчин, что является относительно высоким по сравнению с предыдущими зарегистрированными показателями

.Для этих образцов средняя фрагментация ДНК

составила 48,65 ± 25,59%. Для 2262 образцов

с жизнеспособностью> 58% средняя фрагментация ДНК составила

19,57 ± 10,58% (p <0,001). Таким образом, наши данные

однозначно подтверждают мнение о том, что мужчины с некросспермией

, определенными ВОЗ, имеют более высокую скорость фрагментации ДНК. Однако в

, несмотря на его относительно простое определение и диагноз

ноз, влияние и этиология некроспермии у мужчин

с бесплодием все еще относительно плохо изучены.

Это первое исследование, в котором жизнеспособность используется в качестве предиктора для

уровня фрагментации ДНК сперматозоидов. Учитывая наши результаты, у мужчин с жизнеспособностью сперматозоидов ≥75% рутинное тестирование фрагментации ДНК

вряд ли предоставит какую-либо дополнительную информацию, так как у этих мужчин очень вероятна фрагментация ДНК сперматозоидов

. быть низким. Аналогичным образом, для мужчин

с жизнеспособностью сперматозоидов ≤50% рутинное тестирование ДНК на фрагментацию

может не потребоваться, поскольку> 95% будут иметь целостность ДНК сперматозоидов

> 30%.Основываясь на этих оценках, только

32,9% мужчин в нашей серии, прошедшие тестирование на жизнеспособность и

фрагментации ДНК, получили бы дополнительную информацию в результате тестирования фрагментации ДНК

(таблица 2). У большинства мужчин тестирование на жизнеспособность

может предсказать скорость фрагментации ДНК сперматозоидов, что позволяет паре

избежать анализа фрагментации ДНК сперматозоидов, а

может представлять собой ценную меру экономии средств. Хотя анализ затрат на

mal не проводился, он может представлять собой ценную меру экономии

для пар, проходящих оценку жизнеспособности фермента

, поскольку тестирование жизнеспособности стоит примерно 2

долларов, а тестирование фрагментации ДНК стоит примерно 250 долларов. ,

на основе внутренних и интернет-котировок [15].

Выводы

Жизнеспособность сперматозоидов сильно коррелирует со скоростью фрагментации ДНК

и является предиктором фрагментации ДНК сперматозоидов

. У мужчин с высоким уровнем жизнеспособности сперматозоидов ≥75% или

с низким уровнем жизнеспособности сперматозоидов ≤30% тестирование DFI не может предоставить дополнительную информацию. Учитывая, что тестирование фрагментации ДНК

примерно в 100 раз дороже, чем тестирование жизнеспособности

(250 долларов против 2 долларов), это может представлять собой ценную меру экономии

для пар, проходящих оценку фертильности

.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Вклад авторов

MS написала рукопись вместе с AG и отвечала за сбор и анализ первичных данных

. AD выполнила данные и статистический анализ. KL и EG

помогли пациентам из их практики, а также внесли конструктивный вклад в

сообщения рукописи. AG участвовал в написании рукописи под номером

, а также в сборе данных.BM предоставил пациентов, а также придумал

оригинальную идею для рукописи. KJ помогал пациентам из своей практики,

и

участвовали в оформлении рукописей, редактировании и анализе данных. Все авторы

участвовали в редактировании рукописи и утвердили окончательную рукопись.

Сведения об авторе

1

Отделение урологии, Отделение хирургии, Госпиталь Маунт Синай, Университет

Торонто, Торонто, Онтарио, Канада.

2

Отделение патологии, Mount Sinai

Госпиталь, Университет Торонто, Торонто, Канада.

3

Медицинский институт

Наук, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада.

4

Lunenfeld-Tanenbaum

Научно-исследовательский институт, больница Маунт-Синай, Торонто, Онтарио, Канада.

Получено: 29 декабря 2014 г. Принято: 27 апреля 2015 г.

Ссылки

1. Ирвин Д.С., Маклеод И.С., Темплтон А.А., Мастертон А., Тейлор А.Проспективное клиническое исследование

взаимосвязи между компьютерной оценкой

качества спермы человека и достижением беременности in vivo. Hum

Репродукция. 1994. 9 (12): 2324–34.

2. Шен Х.М., Дай Дж., Чиа ЮВ, Лим А, Онг Си. Обнаружение апоптотических изменений

в сперме у субфертильных пациентов и их корреляция с качеством спермы.

Hum Reprod. 2002. 17 (5): 1266–73.

3. Баррозу Г., Моршеди М., Энингер С.Анализ фрагментации ДНК, транслокации фосфатидилсерина

через плазматическую мембрану и окислительного стресса

в сперматозоидах человека. Hum Reprod. 2000. 15 (6): 1338–44.

4. Гандини Л., Ломбардо Ф., Паоли Д., Капонеккья Л., Фамилиари Дж., Верленгия С.,

и др. Изучение апоптотической фрагментации ДНК в сперматозоидах человека.

Hum Reprod. 2000. 15 (4): 830–9.

5. Брахем С., Джеллад С., Ибала С., Саад А., Мехди М. Статус фрагментации ДНК у

пациентов с некрозооспермией.Syst Biol Reprod Med. 2012. 58 (6): 319–23.

DOI: 10.3109 / 19396368.2012.710869.

6. Эвенсон Д.П., Йост Л.К., Маршалл Д., Зинаман М.Дж., Клегг Э., Первис К. и др. Утилита

анализа структуры хроматина сперматозоидов как диагностический и прогностический инструмент

в клинике репродуктивной медицины. Hum Reprod. 1999. 14 (4): 1039–49.

7. Bungum M, Humaidan P, Spano M, Jepson K, Bungum L, Giwercman A. Прогностическая ценность

параметров анализа структуры хроматина сперматозоидов (SCSA) для

результатов внутриматочной инсеминации, ЭКО и ИКСИ.Hum Reprod.

2004; 19 (6): 1401–8. DOI: 10,1093 / humrep / deh380.

8. Spano M, Bonde JP, Hjollund HI, Kolstad HA, Cordelli E, Leter G. Sperm

Повреждение хроматина

ухудшает фертильность человека. Датская исследовательская группа по планированию первой беременности

. Fertil Steril. 2000. 73 (1): 43–50.

9. Хенкель Р., Хаджимохаммад М., Стальф Т., Хугендейк С., Менерт С., Менквелд Р.,

и др. Влияние повреждения дезоксирибонуклеиновой кислоты на оплодотворение и беременность

.Fertil Steril. 2004. 81 (4): 965–72. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.20 03.09.044.

10. Эвенсон Д.П., Виксон Р. Клинические аспекты фрагментации ДНК сперматозоидов

Выявление и мужское бесплодие. Териогенология. 2006. 65 (5): 979–91.

DOI: 10.1016 / j.theriogenology.2005.09.011.

11. Wilton LJ, Temple-Smith PD, Baker HW, de Kretser DM. Человек мужского пола

бесплодие, вызванное дегенерацией и гибелью сперматозоидов в придатке яичка.

Fertil Steril. 1988. 49 (6): 1052–8.

12. Маллидис К., Лим Т.С., Хилл С.Т., Скиннер Д.Д., Браун Д.И., Джонстон В.И. и др.

Некроспермия и хроническое повреждение спинного мозга. Fertil Steril. 2000. 74 (2): 221–7.

13. Nduwayo L, Barthelemy C, Lansac J, Tharanne MJ, Lecomte P. Management

некросспермии. Контрацепция Fertil Sex. 1995. 23 (11): 682–5.

14. Лерда Д., Рицци Р. Изучение репродуктивной функции у лиц, профессионально

подвергшихся воздействию 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-D). Mutat Res.1991. 262 (1): 47–50.

15. Здоровье OCfWs. Анализ структуры хроматина сперматозоидов. http://www.ohsu.edu/xd/

health / services / women / services / fertility / fertility-services / lab-services / sperm-

chromatin-structure.cfm. Проверено 5 апреля 2014 г.

16. Московцев С.И., Librach CL. Методы оценки жизнеспособности сперматозоидов. Методы

Mol Biol. 2013; 927: 13–9. DOI: 10.1007 / 978-1-62703-038-0_2.

17. Зини А., Камаль К., Панг Д., Уиллис Дж., Ярви К. Биологическая изменчивость ДНК сперматозоидов

денатурация у бесплодных мужчин.Урология. 2001. 58 (2): 258–61.

18. Лабораторное руководство ВОЗ по исследованию и обработке человеческой спермы

. 2010. http://www.who.int/reproductivehealth/publications/infertility/

9789241547789 / en /. На 30 марта 2014 г., 2014 г. Динамическая оценка фрагментации ДНК сперматозоидов

по сравнению с жизнеспособностью сперматозоидов у доказанных фертильных доноров-людей.Fertil Steril.

2009; 92 (6): 1915–9. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2008.08.136.

20. Арендс М.Дж., Моррис Р.Г., Уилли А.Х. Апоптоз. Роль эндонуклеазы.

Am J Pathol. 1990. 136 (3): 593–608.

21. Яаттела М. Запрограммированная смерть клеток: множество способов приличной смерти клеток.

Ann Med. 2002. 34 (6): 480–8.

Samplaski et al. Репродуктивная биология и эндокринология (2015) 13:42 Страница 5 из 6

Фрагментация ДНК сперматозоидов | AACC.org

За последние 40 лет во всем мире мужская фертильность следовала обескураживающей тенденции.С 1970-х годов исследования показывают, что количество сперматозоидов упало более чем на 50% в США, Европе, Австралии и Новой Зеландии. Поскольку нисходящая траектория не показывает никаких признаков замедления или восстановления, возможность точно оценить мужскую фертильность и ее влияние на успешную беременность стала более важной.

В целом от бесплодия страдают от 10% до 15% мужчин в расцвете репродуктивного возраста. Однако в 15% случаев обычный анализ спермы, основанный на параметрах, установленных Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ), не выявляет аномалии сперматозоидов, которые могут вызвать снижение фертильности (вставка ниже).В то время как параметры ВОЗ, установленные в 2010 году (объем теста, количество сперматозоидов и подвижность), они предоставляют информацию только о наличии сперматозоидов, а не о том, насколько эффективно сперма оплодотворяет ооцит и способствует жизнеспособной беременности.

Это означает, что мужчины, попадающие в нормальные пределы ВОЗ, могут иметь значительные повреждения ДНК сперматозоидов. Следовательно, существует потребность в методике, которая предоставляет более подробную информацию о качестве спермы. В последнее десятилетие фрагментация ДНК сперматозоидов (SDF) стала возможным инструментом для выявления уровня молекулярных повреждений, присутствующих в мужской сперме.В настоящее время доступно несколько тестов SDF, по результатам которых можно будет выбрать вариант лечения и услуги по лечению бесплодия. Но остаются сомнения относительно того, насколько широко должны быть применимы и приняты SDF.

Варианты тестирования

SDF отличается от анализа необработанной спермы тем, что исследует количество разрывов и разрывов в ДНК сперматозоидов. Существует четыре основных теста для определения индекса фрагментации ДНК мужчины — доли нормальных и поврежденных сперматозоидов — и каждая стратегия уникальна.

В анализе структуры хроматина сперматозоидов используется химический краситель для окрашивания сломанных сперматозоидов в красный цвет и нормальных сперматозоидов в зеленый цвет.Дисперсия хроматина спермы обрабатывает сперму кислотной денатурацией, после чего нормальная сперма производит ореолы. Конечная дезоксинуклеотидилтрансфераза 2′-дезоксиуридин-5′-трифосфаты (dUTP) для мечения никальных концов использует флуоресцентный dUTP для мечения одно- и двухцепочечных разрывов. Кроме того, SpermComet использует гель-электрофорез с одной ячейкой, при котором только -фрагментированные сперматозоиды проходят через гель.

Несмотря на то, что механизмы разнообразны, эти тесты ценны для пар, которые не смогли определить причину своего бесплодия, сказал Джеймс Хоталинг, доктор медицины, доцент хирургии и содиректор Интегрированного практического отделения репродуктивной медицины Университета им. Медицинская школа штата Юта в Солт-Лейк-Сити.

«SDF — единственный тест, который позволяет нам смотреть на что угодно, кроме параметров основной массы спермы», — пояснил он. «Это позволяет нам взглянуть на то качество упаковки ДНК, которое имеет решающее значение для раннего развития эмбриона».

Перспективный подход

У каждого мужчины есть несовершенства ДНК сперматозоидов, сказала Мэри Сампласки, доктор медицинских наук, доцент кафедры урологии Медицинской школы им. Кека при Университете Южной Калифорнии в Лос-Анджелесе, но уровни выше среди мужчин с недостаточной фертильностью и бесплодием.Высокий SDF, примерно равный более 30%, коррелирует со всеми репродуктивными исходами, включая более низкие показатели успешности естественной беременности, внутриматочной инсеминации и экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), а также более высокую частоту выкидышей.

«К этому ущербу приводят несколько факторов», — сказал Ашок Агарвал, доктор философии, директор Кливлендской клинической лаборатории клинической андрологии и банка спермы. Окислительный стресс, преждевременный апоптоз и факторы окружающей среды, такие как ультрафиолет и излучение мобильного телефона, могут отрицательно повлиять на ДНК.Факторы образа жизни, включая ожирение, диабет и малоподвижный образ жизни, также наносят ущерб сперме. Кроме того, варикоцеле — увеличенные вены яичка, вызывающие перегревание и повреждение сперматозоидов — наблюдается примерно у 40% мужчин с бесплодием.

Имея на руках результаты теста SDF, репродуктологи могут порекомендовать необходимые изменения образа жизни и направить пациентов к вариантам лечения бесплодия, которые предлагают наилучшие возможности для достижения успеха, сказал он.

«Вместо того, чтобы заставлять пациента проходить и играть в русскую рулетку с использованием дорогостоящих технологий, таких как ЭКО или [интрацитоплазматическая инъекция сперматозоидов], которые могут стоить от 10 000 до 15 000 долларов за попытку с менее чем 30% успехом», — сказал он, — «мы можем избежать дорогостоящих и ненужное лечение пар с мужским бесплодием, имеющим повторную неудачу ЭКО или повторяющуюся потерю беременности, с использованием результатов SDF для уменьшения повреждения ДНК до прохождения лечения вспомогательной репродуктивной системой.”

Сампласки согласился, отметив, что SDF предлагает жизненно важную информацию, указывая парам, борющимся с бесплодием, на правильный путь как можно раньше в их лучшие репродуктивные годы. В том числе, добавила она, предлагая мужчинам принимать антиоксиданты, чтобы противодействовать любому повреждению, вызванному окислительным стрессом.

По словам Шины Льюис, доктора философии, FRSB, почетного профессора Белфастской школы медицины, стоматологии и биомедицинских наук в Северной Ирландии,

SDF также поддерживает клинические процедуры, снижающие повреждение ДНК.Удаление сперматозоидов с помощью биопсии яичек до того, как будет выявлено повреждение от окислительного стресса, перемещающееся по придатку яичка (которое она назвала «зоной боевых действий»), может дать более здоровую сперму для процедур фертильности. По ее словам, лечение варикоцеле также предлагает аналогичные улучшения. Фактически, исследования показывают, что мужчины могут испытывать снижение повреждений на 3,4% в течение 3 месяцев с помощью повторного тестирования SDF (Int Urol Nephrol 2015; 47: 1471–7).

Что сдерживает SDF?

Несмотря на предоставление большей степени полезной информации, SDF все еще отстает в поисках широкого внедрения.По словам Амина С. Герати, доктора медицины, помощника профессора урологии и директора по мужскому бесплодию в Урологическом институте Брейди при Медицинской школе Джонса Хопкинса в Балтиморе, в значительной степени легкость доступа является камнем преткновения. «Доступ к этим тестам для пациентов и поставщиков услуг является большой проблемой», — сказал он. «Только избранные лаборатории предлагают это. Не все так поступают ».

Агарвал согласился, но не рекомендовал каждой лаборатории предлагать эти тесты в качестве собственных услуг. Вместо этого, по его словам, они должны выбрать специализированную лабораторию, например, его собственную, уже оснащенную должным образом обученным персоналом, лабораторными помещениями и оборудованием для обработки тестов SDF в соответствии со своими потребностями.

Непротиворечивость и переводимость также были препятствиями. Мало того, что каждый тест SDF по-разному оценивает фрагментацию ДНК, каждый также имеет свою точку отсечения для диагностики уровней качества спермы. Хотелинг подчеркнул, что для облегчения принятия тестов процедуры и отчеты о результатах должны быть стандартизированы.

«Существует много различий в том, как проводится тест», — сказал он. «Это не одно и то же в разных местах, поэтому сложно сравнивать результаты в разных лабораториях». Сампласки согласился, заявив, что уровень существующей дифференциации заставляет репродуктологов неохотно заказывать тесты SDF чаще.

Однако, как и в случае со всеми другими тестами, до тех пор, пока методы SDF не будут проанализированы в более крупных клинических испытаниях и не будут предоставлены надежные, воспроизводимые результаты, поставщики медицинских услуг будут колебаться относительно предложения теста для более широкой популяции пациентов. Даже будучи первоначальным сторонником SDF, Герати признал, что данных, подтверждающих надежное использование методов, до сих пор не появилось. Однако эти функциональные тесты предоставляют полезную информацию для определенной группы мужчин, борющихся с бесплодием.

«Я все еще использую фрагментацию ДНК сперматозоидов, но, по моему мнению, ее основная роль — для кого-то с нормальными параметрами спермы, чей партнер может иметь повторную потерю беременности», — сказал Герати.«Мы можем решить, откуда должна поступать сперма для служб репродуктивной медицины и что мы можем сделать, чтобы оптимизировать этот выбор. Вот в чем действительно заключается польза от фрагментации ДНК «.

Тем не менее, сказал Агарвал, SDF — одно из самых важных достижений в области мужской фертильности за последние 60 лет. Хотя он все еще находится на ранней стадии внедрения, он дает надежду на успешную беременность в тех случаях, когда бесплодие по мужскому фактору ранее не было диагностировано.

«Бесплодие — это сложно, и фрагментация ДНК сперматозоидов — важная часть тестирования у пациентов мужского пола, но это не серебряная пуля», — подчеркнул он.«Это один из способов исследовать, искать и находить скрытые проблемы, о которых не говорит анализ спермы, и это очень важно. Но это не для всех пациентов, страдающих бесплодием ».

Шина Льюис — основательница Examen, производитель тестов SpermCOMET и управляющий директор Lewis Fertility Testing, Ltd., дочерней компании Королевского университета в Белфасте.

Уитни Дж. Палмер — внештатный журналист из Холли-Спрингс, Северная Каролина. Электронная почта: [электронная почта защищена]

Фрагментация ДНК сперматозоидов — Центр репродуктивной медицины Вирджинии Центр репродуктивной медицины Вирджинии

Что такое тест SCSA®?

Тест SCSA, или анализ структуры хроматина сперматозоидов, позволяет быстро и точно выявлять мужчин, у которых меньше шансов забеременеть естественным путем или с помощью ЭКО.Это достигается путем определения процента сперматозоидов с высоким уровнем фрагментации ДНК, то есть индекса фрагментации ДНК (% DFI).

Тест основан на хорошо зарекомендовавших себя исследованиях и методах. Разработанный в течение более чем 20 лет, SCSA стал предметом более 125 статей, опубликованных в рецензируемых журналах и периодических изданиях.

* Этот тест предлагается ТОЛЬКО для наших пациентов.

Что такое хроматин сперматозоидов?

23 хромосомы в головке сперматозоида состоят из хроматина, который состоит из ДНК и белков.

Какую уникальную информацию предоставляет SCSA о мужском бесплодии?

Данные

SCSA предполагают клинически значимый порог для оценки мужского бесплодия. Клинические исследования показывают, что если> 30% сперматозоидов в образце спермы имеют фрагментацию ДНК (> 30% DFI), вероятность успешной беременности значительно снижается.

Может ли сперма с нормальной формой и подвижностью иметь высокий уровень фрагментации ДНК по оценке SCSA?

Хотя это и менее вероятно, сперматозоиды нормальной формы и подвижности могут иметь высокий уровень фрагментации ДНК.Таким образом, SCSA выявляет мужское бесплодие, которое невозможно определить с помощью обычного анализа спермы.

Если образец спермы имеет высокий процент сперматозоидов с фрагментированной ДНК, является ли это состояние постоянным или может со временем улучшиться?

Результаты

SCSA значительно более стабильны, чем результаты, полученные с помощью обычного анализа спермы. Однако небольшой процент мужчин, граничащих с бесплодием, может иметь относительно нестабильное качество ДНК по оценке SCSA. У этих мужчин может быть низкий потенциал фертильности (> 30% DFI) в течение нескольких месяцев, а затем резко улучшиться с наступлением беременности в течение месяца, когда данные SCSA показывают низкий уровень фрагментации ДНК.Таким образом, повторный тест рекомендуется через два-три месяца после плохих результатов SCSA.

Что вызывает повышенный уровень фрагментации ДНК?

Фрагментация ДНК в сперматозоидах может быть результатом многих факторов, включая, помимо прочего, окислительный стресс, болезнь, диету, употребление наркотиков, высокую температуру, повышенную температуру яичек, загрязнение воздуха, курение сигарет и возраст (старше 40 лет и старше).

Где находятся лаборатории, сертифицированные Департаментом здравоохранения и социальных служб (CLIA) для SCSA?

В настоящее время SCSA Diagnostics в Южной Дакоте является единственной лабораторией, утвержденной CLIA для SCSA.Сертификация CLIA гарантирует, что анализ будет проводиться в соответствии с высочайшими стандартами и что данные пациентов будут обрабатываться и архивироваться надлежащим образом.

Как образцы спермы отправляются в SCSA Diagnostics?

Небольшая порция сырой сжиженной спермы с помощью пипетки переносится в пробирку и помещается в резервуар с жидким азотом (LN2), где образец немедленно замерзает. Емкость для LN2, включая замороженный образец, отправляется в ночное время из клиники пациента или домой в SCSA Diagnostics по Federal Express.

Что показывает клинический отчет SCSA?

В нашем клиническом отчете SCSA перечислены три статистические категории потенциала фертильности. Они были получены в результате всестороннего исследования потенциала мужской фертильности без медицинского вмешательства:

Отличный потенциал фертильности ~ <15% DFI
Хороший потенциал фертильности ~ 15-29,9% DFI
Низкий потенциал фертильности ~> 30% DFI

Текущие данные показывают, что вероятность успешной беременности значительно снижается, когда процент сперматозоидов с фрагментированной ДНК составляет> 30%.

Может ли тест SCSA измерить уровни фрагментации ДНК сперматозоидов у всех мужчин?

№. Результаты теста SCSA могут быть неубедительными для мужчин с чрезвычайно низким количеством сперматозоидов (от <500 000 / мл до 750 000 / мл) и / или высоким уровнем семенного мусора. Важно, чтобы пациенты проконсультировались со своим врачом, чтобы учесть эти факторы, прежде чем заказывать тест SCSA.

Измеряет ли тест SCSA другие отклонения хроматина сперматозоидов, кроме фрагментации ДНК?

В дополнение к DFI, тест SCSA определяет фракцию сперматозоидов с высокой стабильностью ДНК (HDS).Сперматозоиды HDS считаются незрелыми с необработанными ядерными белками и / или плохо конденсированным хроматином. Предварительные данные показывают, что образцы спермы с высоким процентом сперматозоидов HDS (> 15%) могут иметь более низкие показатели оплодотворения при обычном ЭКО (но не при ИКСИ).

Свяжитесь с нами, чтобы узнать больше о фрагментации ДНК сперматозоидов.